Индукция ферментов в норме и патологии - Крицман М.Г.
Скачать (прямая ссылка):
исследованного фермента. В этих условиях эксперимента авторы наблюдали
весьма значительную устойчивость тирозин-аминотрансферазы. При длительной
8-10-часовой инкубации гомогенатов печени крыс, которым был введен
индуктор, как в аэробных, так и в анаэробных условиях
58
уровень активности тирозин-аминотрансферазы практически не изменялся,
несмотря на принадлежность исследуемой аминотрансферазы к группе
ферментов с весьма непродолжительным периодом (2-3 часа) полужизни.
При этом наблюдалось практически полное отсутствие атакуемости
индуцированной тирозин-аминотрансферазы трипсином, химотрипсином, а также
протеиназами бактериального происхождения (очищенных различными приемами)
.
Суммируя данные, полученные in vitro, а также данные исследования
процесса распада других индуцированных ферментов, авторы выдвинули
представление о необходимости при обсуждении механизма индуцированного
образования ферментов учитывать возможность того, что повышение их
активности связано с замедленным распадом.
В поисках критерия для суждения о природе индуцированных ферментов ряд
авторов (Kenney, 1962; Segal, Beattie, Hopper, 1962; Segal, Rosse,
Hopper, Weber, 1962) провел сравнительные исследования ферментных
препаратов высокой степени очистки, выделенных из печени интактных и
подвергнутых индуцирующему воздействию крыс. При этом были обнаружены
сходство кинетики, чувствительности к действию температуры, адсорбционной
способности, а также иммунологических свойств.
Далее было показано (Rosen, Milholland, 1962, 1963), что введение
аналогов L-триптофана (D-триптофан, аце-тил-В-триптофан, индол, DL-5-
окситриптофан и серотонин) сопровождается существенной активацией
тирозин-аминотрансферазы печени как интактных, так и адренал-
эктомированных крыс. Серотонин и DL-5-окситриптофан являлись наиболее
мощными активаторами и вызывали повышение ферментативной активности в 5-6
раз по сравнению с контролем. При этом индукция тирозин-аминотрансферазы
значительно тормозилась пуромицином и этионином. Авторы подчеркивают, что
у адреналэктоми-рованных крыс пуромицин полностью блокировал индуцируемое
триптофаном повышение активности этого фермента.
Они считают, что полученные результаты в экспериментах с пуромицином и
этионином - ингибиторами синтеза белка, указывают на то, что по крайней
мере большая часть индуцированной активности тирозин-аминотрансферазы
отражает синтез белка этого фермента de novo.
59
^Под углом зрения доказательств отсутствия узкоспецифической индукции
тирозин-аминотрансферазы существенный интерес представляли исследования,
в которых показано (Litwack, Diamondstone, 1962) резко выраженное
повышение активности фермента при введении высокополимерной дрожжевой
рибонуклеиновой кислоты (300 мг!кг). При детальном изучении этого явления
оказалось, что
повышение активности тирозин-аминотрансферазы во времени аналогично
обнаруженному при субстратной или гормональной индукции (Lin, Knox,
1958). Активность этого фермента резко возрастает через 1 час после
введения РНК, максимум активности наблюдается после 4 часов, которая
через 12-14 часов снижается до исходного уровня (рис. 11); введение
гепарина (300 мг на 1 кг веса) также значительно стимулировало активность
тирозин-аминотрансферазы. Этот эффект, как и упомянутый выше, наблюдался
только у интактных животных; у адреналэктомированных животных ни РНК, ни
гепарин не активировали тирозин-аминотрансферазу. Метионин, лизоцим, АТФ
и другие химические соединения, особенно в сочетании с тирозином или
гидрокортизоном, оказывают выраженное индуцирующее влияние на активность
этого фермента; этионин предотвращает индуцирующее действие тирозина,
гидро-
11. Изменение активности тирозин-аминотрансферазы индуцированным
введением высокополимерной РНК (Litwack, Diamondstone, 1962):
1 - высокополимерная РНК:
2 - гепарин; 3 - NaCl, 4 - контроль (без введения).
О
? 3 if 5
60
кортизона и рибонуклеиновой кислоты на активность тирозин-
аминотрансферазы, причем указанное ингибирование снимается введением
метионина.
Неспецифическая индукция тирозин-аминотрансферазы обнаружена и в
исследованиях других авторов (Litwack, 1960; Litwack, Diamondstone, 1961,
1962; Diamondstone, Litwack, 1962; Litwack, Stears, Diamondstone, 1963).
В этих работах,
12. Повышение активности тирозин-аминотрансферазы как функция от
времени введения гидрокортизона (Litwack, Stears, Diamondstone, 1963):
1 - гомоген ат; 2 - надоса-дочная жидкость; 3 - ядер-ная фракция; 4 -
микросомы; 5 - митохондрии.
время после введения еидрояортизона. мин
однако, выявилось, что для индуцированного образования фермента
необходимо присутствие надпочечников или введение гидрокортизона. Для
выяснения, имеет ли .место опосредованное действие глюкокортикоидов на
неспецифическое стимулирование активности тирозин-аминотрансферазы, были
изучены активность этого фермента в субклеточных структурах печени и
параллельно с этим распределение введенного 4-С14-гидрокортизона
