Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел - Корниенко И.В.
ISBN 5-7509-0904-2
Скачать (прямая ссылка):
РАСТВОРЫ ДЛЯ ЭКСТРАКЦИИ И АНАЛИЗА
ВЫДЕЛЕННОЙ ДНК
У
Растворы для экстракции ДНК
2QX SSC fl л)
Растворяют 175,3 г NaCl и ЫазЦитрат-2Н20 в 800 мл деионизованной воды. Довести pH до 7,0 раствором НС1. Довести объем деионизованной водой до 1 литра. Полученный раствор автокла-вировать, либо стерилизовать фильтрацией через фильтр 0,22 мкм.
IX SSC ПОР мл)
К 5 мл 20Х SSC добавить 95 мл деионизованной воды.
2.0 М Na-анетат (1 л)
164,1 г Ыа-ацетата (безводного) растворить в 1 литре деионизованной воды.
0.2 М Na-аыетат ПОР мл)
К 10 мл 2,0 М Ыа-ацетата добавить 90 мл деионизованной воды.
10 %-ный раствор натрия додепилсульфата (SDS)
(100 мл)
Растворяют 10 г SDS в 80 мл деионизованной воды при 60 — 65°С, объем доводят до 100 мл.
(Осторожно! Сухой SDS Чрезвычайно летуч!).
20%-ный раствор натрия долепилсульфата (SDS)
(100 мл)
Растворяют 20 г SDS в 800 мл деионизованной воды при 60 — 65°С и доводят объем раствора до 1 л. (Осторожно! Сухой SDS Чрезвычайно летуч\).
Раствор протеиназы К. 10 мг/мл (10 мл)
Растворяют 100 мг сухой протеиназы К в 10 мл деионизованной воды. Разливают на порции.
Хранят при температуре -20°С.
Раствор протеиназы К. 2 мг/мл (10 мл)
Растворяют 20 мг сухой протеиназы К в 10 мл деионизованной воды. Разливают на порции. Хранят при температуре -20°С.
1 М раствор трис-НС1. pH 8.0 (1 л)
Растворяют 121,1 триса в 800 мл деионизованной воды, концентрированной соляной кислотой (приблизительно 45 мл) доводят pH до 8,0. Доводят объем раствора до 1 л.
0.1 М раствор трис-НС1. pH 8.0 (1 л)
К 100 мл 1 М раствор трис-HCl, pH 8,0 добавляют 900 мл деионизованной воды.
1 М раствор трис-НС1. pH 7.5 (1 л)
Растворяют 121,1 г триса в 800 мл воды, концентрированной соляной кислотой (приблизительно 65 мл) доводят pH до 7,5. Доводят объем раствора до 1 л.
Фенол. pH 8.0
Фенол кристаллический расплавляют при 70°С, перегоняют при 160°С и добавляют 8-гид-рооксихинолин до конечной концентрации 0,1 % (1 г на 1 л фенола). Это соединение является антиоксидантом; придает желтый цвет фенольной фракции. Полученное соединение насыщают 1 М раствором трис-НС1, pH 8,0, а затем 0,1 М раствором трис-НС1, pH 8,0, содержащим 0,2%-меркаптоэтанол, до тех пор, пока pH водной фазы не станет больше 7,6. Насыщенный буфером раствор фенола хранят при +4°С в течение одного месяца. (Осторожно! Фенол является едкой жидкостью и вызывает тяжелые ожоги. Работая с ним, следует надевать предохранительные очки и перчатки. При попадании на кожу, его нужно смыть большим объемом спирта, затем водой с мылом).
Хлороформ/изоамиловый спирт (24:1) 250 мл
Смешивают 240 мл хлороформа с 10 мл изо-амилового спирта и хранят неограниченное время под слоем воды при комнатной температуре.
Фенол/хлороформ/изоамиловый спирт (25:24:1)
500 мл
Смешивают вместе 250 мл водонасыщенного фенола, 240 мл хлороформа и 10 мл изоамилово-го спирта и хранят неограниченное время под слоем воды при комнатной температуре.
0.5 М раствор ЫаоЭДТА. pH 8.0 (1 л)
Растворяют 186,1 г двузамещенной натриевой соли №2ЭДТАх2Н2<Э в 800 мл деионизованной воды и доводят pH раствора до 8,0 с помощью едкого натра (динатриевая соль ЭДТА не растворяется до тех пор, пока pH раствора не будет
8.0),затем доводят объем раствора до 1 л.
0.2 М раствор ЫаоЭДТА. pH 8.0 (1 л)
Растворяют 74,4 г двузамещенной натриевой соли Ыа2ЭДТАх2Н20 в 800 мл деионизованной воды и доводят pH раствора до 8,0 с помощью едкого натра (динатриевая соль ЭДТА не растворяется до тех пор, пока pH раствора не будет
8.0),затем доводят объем раствора до 1 л.
Трис-ЭДТА (ТЕ) буфер pH 8.0: 10 шМ трис-НС1. pH 8.0: 1 mM Nao3ATAx2HoO. pH 8.0 (1 л)
Смешивают 10 мл 1 М трис-НС1, pH 8,0; 0,2 мл 0,5 М ЭДТА, pH 8,0; 990 мл деионизованной воды.
Лизируюший раствор: 10 шМ трис-НС1. pH 7.5: 10 тМ Ыа2ЭАТА: 50 mM NaCl: 2 % SDS (100 мл)
Смешивают 1 мл 1 М трис-НС1, pH 7,5; 2 мл 0,5 М ЭДТА, pH 8,0; 1 мл 5 М NaCl; 10 мл 20% SDS; добавляют 86 мл деионизованной воды.
5 М раствор NaCl (100 мл)
Растворяют 29,22 г NaCl в 80 мл деионизованной воды и доводят объем раствора до 100 мл.
0.9% раствор NaCl (100 мл)
Растворить 0,9 г NaCl в 100 мл деионизованной воды.
* ¦
1 М раствор литиотрейтола (ДТТ) (20 мл)
Растворяют 3,09 г ДТТ в деионизованной воде, доводят объем до 20 мл. Разливают на порции по 1 - 5 мл и хранят при температуре -20 °С.
70% этиловый спирт (из 96%)
К 70 мл 96% этилового спирта прибавить 26 мл деионизованной воды. Перемешать.
80% этиловый спирт (из 96%)
К 80 мл 96% этилового спирта прибавить 16 мл деионизованной воды. Перемешать.
5%-ная взвесь ионообменной смолы Chelex 100
(20 мл)
Помещают 0,5 г Chelex 100 в 7 мл деионизованной воды, доводят объем до 10 мл. Chelex в воде не растворяется. Суспензия Chelex должна быть всегда свежая и ее готовят непосредственно перед использованием. Значение pH взвеси Chelex 100 является критическим параметром, определяющим эффективность экстракции. Значение pH взвеси должно иметь значение 9-11.
