Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел - Корниенко И.В.
ISBN 5-7509-0904-2
Скачать (прямая ссылка):
10. Fisher D.L., Holland M.M., Mitchell L., Sledzic P., Wilcox A.W., Wadhams М., Weedn V.W. Extraction, evaluation, and amplification of DNA from decalcified and undecalcified United States Cilil War bone // J. Forensic Sci., 1993. — Vol. 38. - P. 60-68.
11. DNA Procedures Manual. Extraction of DNA from teeth. Ver.2.0 / Armed Forces Institute of Pathology, DNA Identification Laboratory, Washington, 1997, P. 1-8.
12. M4mstad H., Pfeiffer H., Yoon C., Teivens A. Demonstration and semi-quantification of mt DNA from human dentine and its relation to age // Int. J. Legal Med., 1999. - Vol. 112. - P. 98-100.
III. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ НОГТЕВОЙ ПЛАСТИНКИ И ВОЛОСА
В 124 ЦЛМКИ производные кожи, такие как ногтевая пластинка и волосы, составляют примерно 17% от общего объема поступающих для анализа образцов (из них 97% приходится на ногтевые пластинки). Как ногти, так и волосы содержат достаточное количество генетического материала, необходимого для проведения молекулярно-генетической идентификации. Исходя из нашего опыта, волосы, полученные от трупа с сильными гнилостными изменениями, практически не содержат ядерной ДНК, пригодной для идентификации, несмотря на то, что свежевы-рванный волос содержит около 250 нг ДНК.
Волосы покрывают почти всю поверхность кожи. Наибольшая плотность их расположения на голове, где их общее число может достигать 100000. Различают три вида волос: длинные, к которым относятся волосы головы, бороды, усов, а также растущие в подмышечных впадинах и на лобке; щетинистые — волосы бровей, ресниц, а также растущие в наружном слуховом проходе и в преддверии носовой полости; пушковые, покрывающие остальные участки кожного покрова.
Волосы являются эпителиальным придатком кожи. В волосе различают две части стержень и корень. Стержень волоса находится над поверхностью кожи и образован корковым веществом и кутикулой. Корень скрыт в толще кожи и доходит
до подкожной жировой клетчатки. Корень располагается в волосяном мешке (фолликуле), стенка которого состоит из внутреннего и наружного эпителиальных (корневых) влагалищ и соединительнотканной волосяной сумки (рис. 12).
Рисунок 12. Строение волоса (по Афанасьеву Ю.К, Юриной Н.А. и др., 1999).
1 — дермальное корневое влагалище (волосяная сумка); 2 — наружное эпителиальное корневое влагалище; 3 — два слоя внутреннего эпителиального корневого влагалища; 4 — кутикула волоса; 5 — корковое вещество волоса; 6 — мозговое вещество волоса; 7 — волосяная воронка; 8 — ростковой слой эпидермиса; 9 — роговой слой эпидермиса; 10 — сальная железа; 11 — мышца, поднимающая волос; 12 — волосяная луковица; 13 — волосяной сосочек.
Корень волоса заканчивается волосяной луковицей, являющейся волосяной матрицей, из которой происходит рост волоса. Она состоит из эпителиальных клеток, способных к размножению. Размножаясь, клетки волосяной луковицы передвигаются в мозговое и корковое вещество корня волоса, его кутикулу и во внутреннее эпителиальное влагалище. В более удаленных от волосяной луковицы участках клетки погибают и превращаются в роговые чешуйки.
Мозговое вещество хорошо выражено только в длинных и щетинистых волосах, в пушковых оно отсутствует. Примерно до уровня протоков сальных желез мозговое вещество состоит из не полностью ороговевших клеток, в которых обнаруживаются уплотненные ядра или их остатки, только выше указанного уровня клетки подвергаются полному ороговению.
Корковое вещество волоса составляет основную его массу. На протяжении большей части корня и всего стержня волоса корковое вещест-
во состоит из плоских роговых чешуек, содержащих твердый кератин и остатки ядер. Только в области шейки волосяной луковицы в этом веществе встречаются не полностью ороговевшие клетки с овальными ядрами.
Рисунок 13. Выпавший и вырванный волосы
(по Барсегянц Л.О., 1999).
1 — выпавший волос; 2 — отживающий волос (ороговевшая влагалищная оболочка); 3 — вырванный жизнеспособный волос (свисают влагалищные оболочки).
Рисунок 14. Жизнеспособные волосы (по Барсегянц Л.О.,
1999).
1 — вырванный жизнеспособный волос;
2 — жизнеспособный волос с оторванной луковицей.
Перед началом экстракции ДНК эксперт должен определить, представленью ему выпавшие или вырванные волосы. Вырванный волос отличается от выпавшего по характеру его луковицы и присутствию на ней влагалищных оболочек. Луковица жизнеспособного вырванного волоса имеет жизнеспособные клетки (рис. 13, 14). В последних различимы ядра, а иногда и границы. У этих волос часть луковицы может быть оторвана и тогда нижний край луковицы представляется неровным, зубчатым. Если луковица вырванного волоса цела, то на нижней поверхности ее можно видеть вдавление для волосяного сосочка.
Участками волоса, содержащими наибольшее количество ядерной ДНК, являются корневая и прикорневая зоны. Стержень волоса содержит в
основном митохондриальную ДНК. Причем темные волосы, как правило, дают больший процент успешных амплификаций мтДНК по сравнению с белыми волосами (табл. 5).
