Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел - Корниенко И.В.
ISBN 5-7509-0904-2
Скачать (прямая ссылка):
В эукариотических клетках ядерная ДНК ассоциирована с положительно заряженными белками — гистонами, образуя стабильный хроматин. Однако ДНК в виде хроматина может легко «ломаться» с образованием более мелких фрагментов при обычных манипуляциях или в течение очистки ее от гистонов [14]. Это связано с тем, что длина одной молекулы ДНК из диплоидной клетки человека составляет примерно 2 м, в то время как ее диаметр — около 2 нм. Таким образом, простое перемешивание или даже неосторожный отбор пипеткой раствора ДНК приводит к существенному уменьшению ее молекулярной массы и, что самое важное, падению
титра матриц, пригодных для ДНК-типирования. Кроме того, ДНК может быть подвержена деградации нуклеазами, находящимися в лизосо-мах и переходящими в активное состояние при гомогенизации тканей [15]. Нуклеиновые кислоты чувствительны к расщеплению ферментами (нуклеазы, например, могут быть обнаружены даже на кончиках пальцев исследователя), они не терпят экстремальных значений pH и температуры.
Очевидно, что применение одних и тех же методов экстракции ДНК без учета специфики биологического материала не позволяет получать препараты ДНК, отвечающие всем условиям качественной экспертизы. Поэтому в настоящем руководстве мы рассмотрели все базовые методы, которые были апробированы и нашли применение в 124 Центральной Лаборатории Медико-криминалистической Идентификации Министерства Обороны Российской Федерации (124 ЦЛМКИ МО РФ) для экстракции ДНК из различных тканей.
Основными диагностическими элементами, которые используются при ДНК-идентификации личности, являются определенные локусы (участки) или гены ядерной (хромосомной) и митохондриальной ДНК. Каждая диплоидная клетка человека содержит приблизительно 5-6 пг суммарной ДНК, основная масса которой представлена ядерной ДНК, и только примерно 1% от
1/2 1*
И
общей массы ДНК приходится на долю митохондрий.
Объекты биологического происхождения могут сильно отличаться друг от друга по содержанию ДНК. Так, например, периферическая кровь человека может содержать от 30 до 60 мкг ДНК на 1 мл, а сперма примерно 480 мкг ДНК в 1 мл [14]. Это должно учитываться экспертом при принятии решения о том, какое количество биологического материала необходимо брать для анализа из различных тканей человека.
Количество и качество ДНК, экстрагированной для целей идентификации личности, в большой степени зависит от сохранности биологического материала. Поэтому в настоящем руководстве также подробно описаны основные требования к методам отбора, транспортировки и хранению биологических образцов, предназначенных для молекулярно-генетической идентификации личности, которые используются в лабораторной практике 124 ЦЛМКИ Министерство Обороны Российской Федерации.
Литература:
1. Jeffreys A., Wilson V., Thein S. Individual specific fingerprints of human DNA // Nature, 1985. - Vol. 361. - P. 75-79.
2. Иванов П.Л., Гуртовая С.В., Вербовая Л.В., Болдеску Н.Г., Плаксин В.О., Рысков А.П. Ге-
номная «дактилоскопия» в экспертизе спорного отцовства и определения биологического родства // Судебно-медицинская экспертиза, 1990. — № 2. — С. 36-38.
3. Jeffreys A.J., Royle N.J., Wilson V., Wong Z. Spontaneous mutation rates to new length alleles at tandem-repetitive hypervariable loci in human DNA // Nature, 1988. - Vol. 332. - P. 278-281.
4. Иванов П.Л. Геномная дактилоскопия: гипер-вариабельные локусы и генетическое маркирование // Молекулярная биология, 1989. —
Т. 23. — С. 341.
5. Иванов П.Л., Гуртовая С.В., Плаксин В.О, Вербовая Л.В., Рысков А.П., Болдеску Н.Г. Геномная «дактилоскопия» с использованием в качестве зонда ДНК бактериофага М13 (экспертиза вещественных доказательств и идентификация личности) // Судебно-медицинская экспертиза, 1989. — № 4. — С. 39-42.
6. PCR strategies. Eds. Innis М.А., Gelfand D.H., Sninsky J.J. San Diego: Academic Press, CA, 1995, 370 p.
7. PCR, The Polymerase Chain Reaction. Eds. Mullis K.B., Ferre F., Gibbs R.A. Boston: Birk-hauser, MA, 1994, 458 p.
8. Inman K., Rudin N. An Introduction to Forensic DNA Analysis. Boca Raton, New York: CRC Press, 1997, 256 p.
9. Kirby L.T. DNA Fingerprinting: an Introduction. New York: Stockton Press, 1992, 366 p.
10. Иванов П.Л. Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма
длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства. Методические указания № 98/253 (утв. Минздравом РФ 19.01.99) // Судебно-медицинская экспертиза, 1999. —
№. 5. — С. 35-41.
11. Гыске Л.И., Иванов П.Л. Анализ полиморфизма длины амплификационных фрагментов ДНК в судебной идентификационной экспертизе: возможные источники ошибок при неоптимальных условиях полимеразной цепной реакции // Судебно-медицинская экспертиза, 1995. — № 4. — С. 12-17.
12. Akane A., Matsubara К., Nakamura Н., Така-hashi S., Kimura К. Identification of the heme compound copurified with deoxyribonucleic acid (DNA) from bloodstains, a major inhibitor of polymerase chain reaction (PCR) amplification // J. Forensic Sci. 1994. Vol. 39. P. 362-372.
