Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел - Корниенко И.В.
ISBN 5-7509-0904-2
Скачать (прямая ссылка):
Уг 2"
43
График режимов перевозки замороженных
образцов
В приведенной ниже таблице 2 представлены параметры для транспортировки замороженного материала к месту постоянного хранения биологических образцов ДНК. Она регламентирует ответственность грузоотправителя за упаковку биологических образцов в соответствии с правилами таким способом, чтобы обеспечить их охлажденное состояние вплоть до места постоянного хранения биологических образцов ДНК.
Таблица 2
Параметры транспортировки замороженных
биологических образцов
Температура Время Вес об Количество
наружного транспорти разца сухого льда
воздуха (°С) ровки (часы)
До 10° 72 10 г 50 г
До 10° 48 15 г 75 г
До 10° 24 20 г 100 г
| 72 10 г 50 г
1
Н-*
О
0
1
ГО
о
1 48 15 г 75 г
о
CN
!
о
О
о 24 20 г 100 г
0
1
to
о
1
27° - 38° 72 5 г 60 г
27° - 38° 48 10 г 120 г
27° - 38° 24 15 г 100 г
Выше 38° Не рекомендуется транспортировка,
требующая более 48 часов
Выше 38° 48 5 г 50 г
Выше 38° 24 10 г 100 г
Хранение биологических образцов
в депозитарии
При отборе проб в полевых условиях и на местах происшествий, безусловно, используются методы консервации биологических тканей. Однако, нужно помнить, что это временная консервация тканей, служащая только для приостановки процессов деградации проб во время их сбора и транспортировки.
Стационарное хранение ДНК-содержащих биологических образцов и образцов выделенной ДНК осуществляется в депозитарии. Депозитарий (архив, или хранилище) — это комплекс помещений, оборудования и специалистов, обладающих знаниями и навыками по подготовке к хранению, собственно организации хранения, подготовке образцов для транспортировки и расконсервации образцов для проведения экспертных исследований.
В депозитарии ДНК обычно хранится в одном из трех состояний.
1. В виде цельной ткани.
2. На твердых носителях с консервантами (например, кровь на FTA-картах).
3. В виде экстрагированной ДНК.
В зависимости от состояния, типа исходной ткани и применяемых методов хранения, неиз-влеченный ДНК-материал может сохраняться некоторое время без существенной деградации даже при комнатной температуре (в лиофильно высушенном состоянии или кровь на FTA-картах), при охлаждении до +4° С (при этом речь может идти лишь о приостановке процессов биодеградации), может быть заморожен от — 20°С до — 195,8°С (промышленные холодильные установки и жидкий азот), законсервирован в солевом растворе NaCl или в химических денатурирующих агентах (этиловый спирт, эфир или их сочетание). Однако степень сохранности ДНК при разных способах хранения материала очень сильно варьирует. Наиболее предпочтительна фиксация объемных фрагментов тканей и костей замораживанием (рис. 1). Напротив, фиксация фрагментов тканей путем помещения в солевой раствор приводит к деградации препаратов ДНК, как митохондриальной, так и ядерной фракции.
Для хранения биологических образцов в стационарных условиях депозитария руководствуются следующими принципами: все биологиче-
ские образцы, находящиеся на хранении в депозитарии, являются условно патогенными, при хранении должно быть обеспечено отсутствие генетической контаминации, методы хранения биологических проб должны гарантировать минимальную деградацию биополимеров в процессе транспортировки и хранения, легкость выделения ДНК из тканей традиционными методами, относительно невысокие затраты в процессе хранения материала и сведение к минимуму вредных для здоровья экспертов факторов. В силу вышеназванных причин в депозитариях, как правило, используют методы хранения клеточных суспензий в высушенном виде на твердых носителях (FTA-карты) и методы криоконсервации тканей.
1 2 3 4 5 6
Рисунок 1. Гель — электрофорез препарата сум-
марной ДНК в агарозном геле. Дорожки (1), (2) и (3) — ДНК, выделенная из замороженных мышц; (4), (5), и (6) — ДНК, выделенная из мышцы, находившейся в 0,85% солевом растворе (NaCl). Обратите внимание на полосы ДНК большой молекулярной массы (более чем 20 тыс. нуклеотидных пар длиной, обозначены стрелкой), выделенной из замороженной ткани и ДНК низкой молекулярной массы (диффузный материал размером несколько сотен нуклеотидных пар) от образцов, хранившихся в солевом растворе (L.T. Kirby, 1992).
