Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
Следует как можно чаще производить визуальную оценку микробного заражения культуры по быстрому изменению pH. Как правило, заражение сопровождается снижением pH, хотя некоторые грибы могут индуцировать увеличение pH. Заражение может также приводить к помутнению среды, появлению межклеточного гранулярного материала при микроскопическом обследовании и к появлению взвешенного в среде неидентифи-цированного материала. Во всех этих случаях культуральные
Одинаковая конечная плотность клеток при длительном выращивании
Стандартная кривая роста. < Время генерации-24часа,, лаг-период-24часа
Снижение скорости роста
Различное количество клеток через 3 суток в двух культурах с одинаковой скоростью роста
Одинаковое количество клеток через 3 суток в двух культурах с разной скоростью роста
-ная выживаемость Одинаковые скорость роста и продолжительность лаг-периода
или просто увеличение лаг-периода?Предполагают наличие
, „ ^|^__________________________________
1
3
Дни
после посева
сосуды изолируются без открывания пробок и автоклавируются.
В сомнительных случаях образцы культуры следует исследовать в фазово-контрастном микроскопе, путем окраски по Гра-му и с помощью стандартных микробиологических методов (см. гл. 4).
Микоплазма. Источником заражения микоплазмой при культивировании клеток могут быть культуральная среда, сыворотка, трипсин или сам исследователь. Заражение не выявляется невооруженным глазом, и, поскольку оно не приводит к изменению роста культуры, заражение микоплазмой часто остается незамеченным. Следует регулярно (один раз каждые 1—3 мес) проверять культуры на наличие в них микоплазмы, поскольку такое заражение существенно изменяет биохимию клеток, их антигенные свойства и параметры роста культуры. Предложено несколько методов выявления микоплазмы, но наибольшее распространение получил метод флуоресцентного окрашивания ДНК по методу Чена (см. гл. 4).
4.3.6. Заражение культуры другими клетками
Эта проблема будет подробно рассмотрена в гл. 4. Ее важность недооценивается, однако последствия ее проявляются очень часто. Чтобы избежать перекрестного загрязнениия культур, не следует использовать одни и те же бутыли со средой и реагентами при работе с различными линиями клеток. Кроме того, пипетки, имевшие контакт с флаконами и бутылями с клетками, не следует повторно использовать для отбора среды из соответствующих емкостей.
Литература
1. Freshney R. I. (1983). Culture of Animal Cells: Manual of Basic Technique, Alan Liss Inc., New York.
2. Paul J. (1975). Cell and Tissue Culture, Vth edition, Livingstone, Edinburg.
3. Adams R. L. P. (1980). Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology — Cell Culture for Biochemists Work T. S., Burdon R. H. (eds.), Elsevier, Amsterdam.
4. Harris С. C., Trump B. F., Stoner G. D. (1980). Normal Human Tissue and Cell Culture, Methods in Cell Biology, Vol. 21, Academic Press, New York.
5. Wakelam M. J. O. (1985). Biochem. J., 228, 1.
6. Cunha G. R., Chung L. W. K. (1981). J. Steroid Biochem., 14, 1317.
7. Kemp R. B., Hinchliffe J. R. (1984). Matrices and Cell Differentiation, Progress in Clinical and Biological Research, Vol. 15, Alan Liss, Inc, New York.
8. Frame М. C„ Freshney R. /., Vaughan P. F. Т., Graham D. I., Shaw R.
(1984). Br. J. Cancer, 49, 269.
9. Freyer J. P., Sutherland R. M. (1980). Cancer Res., 40, 3956.
10. Kruse P. F. Jr., Miedema E. (1965). J. Cell. Biol., 27, 273.
11. Michalopoulos G., Pitot H. C. (1975). Fed. Proc., 34, 826.
12. Chambard M„ Verrier B., Gabrion J., Mauchamp J. (1983). J. Cell. Biol., 96.
1172.
13. Peehl D. М., Ham R. G. (1980). In Vitro, 16, 526.
14. Piddington R., Moscona A. A. (1967). Biochim. Biophys. Acta, 141, 429.
15. Kato Т., Fukui Y., Turrijf D. E., Nakagawa S., Lim R., Arnason B. G. W.,
Tanaka R. (1981). Brain Res., 212, 393.
16. Levi-Montalcini R. (1964). Science, 143, 105.
17. Sporn М. B., Roberts A. B. (1983). Cancer Res., 43, 3034.
18. Friend C., Scher tt’’., Holland J. G., Sato T. (1971). Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 68, 378.
19. Raff М. C„ Miller R. H., Noble M. (1983). Nature, 303, 390.
20. Lechner J. F., McClendon I. A., Lavesk M. A., Shamsuddin A. М., Harris С. C. (1983). Cancer Res., 43, 5915.
21. Saltier C. A., Michalopoulos G., Saltier G. L., Pitot H. C. (1978). Cancer Res, 38, 1539.
22. Pitot H., Peraino C., Morse P., Potter V. R. (1964). Natl. Cancer Inst. Monographs, 13, 229.
23. Littauer U. Z., Giovanni M. Y„ Glick М. C. (1979). Biochem. Res. Commun., 88, 933.
24 Land H„ Parada L. F„ Weinberg R. A. (1983). Nature, 304, 596.
25. Freshney R. I. (1972). Lancet, II, 488.
26. Ham R. G„ McKeehan W. L. (1978). In Vitro, 14, II.
ГЛАВА 2
РАЗРАБОТКА ХИМИЧЕСКИ-ОПРЕДЕЛЕННЫХ БЕССЫВОРОТОЧНЫХ СРЕД ДЛЯ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ
Г. Маурер
1. Введение
После извлечения клеток из ткани или организма и помещения их в культуру культуральная среда должна обеспечивать все внешние условия, которые клетки имели in vivo. Только в этом случае возможны выживание клеток, их пролиферация и дифференцировка. Внеклеточная среда должна обладать всем необходимым для выживания и роста, то есть обеспечивать клетки питательными и гормональными факторами, а также факторами стромы. Среди биологических сред, оказавшихся пригодными для культивирования клеток вне организма, наибольшее распространение получила сыворотка. И хотя уже частично выяснены потребности клеток, для удовлетворения которых составляют сложные химически определенные среды, добавление 5—20% сыворотки было и, как правило, все еще остается необходимым для поддержания оптимального роста клеток. Часто по различным причинам бывает необходимо избавиться от неидентифицированных компонентов сыворотки, то есть получить химически вполне определенную среду. Различные подходы к созданию таких сред и возникающие при этом проблемы уже нашли отражение в научной литературе [1-9].
