Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Конки Д. -> "Культура животных клеток" -> 71

Культура животных клеток - Конки Д.

Конки Д., Эрба Э., Френши Р., Гриффитс Б. Культура животных клеток — М.: Мир, 1989. — 333 c.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка): kulturajivotnihkletok1989.djvu
Предыдущая << 1 .. 65 66 67 68 69 70 < 71 > 72 73 74 75 76 77 .. 136 >> Следующая

3.2. Элютриационная камера
Стандартная элютриационная камера, показанная на рис. 5.2, А, изготавливается из прозрачной эпоксидной смолы. Образец или элютриационный буфер поступают со стороны основания камеры, так что ток жидкости направлен против центробежной силы. В крышку модифицированной центрифуги J2-21 вмонтировано окно, позволяющее наблюдать за камерой
Рис. 5.3. Стандартная элютриационная камера. Вид in situ после загрузки образца. Стрелки указывают продвигающуюся границу клеток и вход в
основании камеры.
вращающегося ротора, благодаря освещению синхронизованным стробоскопическим источником света. На рис. 5.3 показаны камера, наполненная буфером, и изображение нитей стробоскопической лампы.
При загрузке камеры можно отчетливо видеть границу клеток, постепенно перемещающуюся к выходу (см. рис. 5.3). Такая картина видна при условии, что скорость седиментации клеток во вращающемся роторе точно сбалансирована скоростью тока жидкости через камеру. Дискретная клеточная граница временно исчезает, когда часть клеток удаляется в результате небольшого увеличения скорости тока. После этого граница восстанавливается и опять становится видимой, как только устанавливается равновесие между двумя противоположными силами, действующими на оставшиеся клетки (рис. 5.3).
Геометрия стандартной камеры, имеющей форму конуса, создает градиент скоростей тока от одного конца к другому. Следовательно, -клетки с широким диапазоном различных скоростей седиментации могут удерживаться внутри камеры. В качестве другого варианта -может быть использована камера Сэндерсона (поставляемая фирмой Beckman), в которой клетки с различной скоростью седиментации накапливаются в нижней части с резко расходящимися стенками (рис. 5.2, Б). При ступенчатом увеличении тока жидкости клетки выходят в верхнюю часть камеры, где стенки почти параллельны. Это обеспечивает лучшее разрешение и позволяет разделять клетки, минимально различающиеся по физическим свойствам. В центрипетальном конце этой камеры не видно клеточной границы. Другим отличием от стандартной камеры является конструкция входа у основания. В камеру Сэндерсона клетки и элютриационный раствор входят снизу, а не сбоку, как в стандартной камере. Это предотвращает агрегацию клеток.
3.3. Перистальтический насос
и дополнительная аппаратура
Для прокачивания элютриационого буфера требуется перистальтический насос с переменной скоростью, регулируемой микрометрическим контрольным устройством. Насос по возможности должен быть снабжен устройством для автоматической компенсации изменения нагрузки и обеспечивать линейную зависимость между положениями потенциометра контроля скорости насоса и реальной скоростью тока жидкости в диапазоне, от 10 до 60 мл/мин. Этим требованиям удовлетворяют насосы Watson-Marlow 501 и Cole Parmer Masterflex 7520.
Насос переносит клеточную суспензию или буфер для элю-триации из контейнеров при постоянной температуре в водяной
или ледяной бане. Каждый контейнер соединен с атмосферой через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм (Millipore или Gel-man), и его соединение с насосом осуществляется силиконовыми трубками (внутренний диаметр 0,06—0,12 дюйма, толщина стенки 0,6 дюйма; Cole Parmer) и тефлоновым вентилем, как показано на рис. 5.4. Насос соединен также с входным устройством ротора через манометр, показывающий любую закупорку трассы, и ловушку для пузырьков, которая собирает образующиеся в жидкости пузырьки и предотвращает их попадание в
Ловушка
пузырьнов
Воздушный фильтр i
Буфер
Манометр
Трехходовой
кран *
1 "нз4тРе*;;адовой
Водяная
Баня
Центрифуга
Наблюдательное
окно
'Ламинарным
] БОКС
У Микроскоп
уд
Стерильный
СБОР
фракций
Стробоскопическая
лампа
Рис. 5.4. Диаграмма, представляющая полную установку для элютриации.
камеру, где они могут разрушать суспендированные клетки. Выходное устройство ротора через проточную ячейку (Starna) соединено с устройством для стерильного отбора проб, размещенным в ламинарном боксе. Проточная ячейка обеспечивает регистрацию прохождения клеток с помощью микроскопа с малым увеличением или по поглощению при 660 нм. Это позволяет выборочно отбирать пробы, содержащие клетки, что обеспечивает сбор фракций в минимальном объеме.
3.4. Полная система элютриации
Взаиморасположение ротора и вспомогательных устройств может изменяться в зависимости от условий эксперимента. Можно, например, собрать систему, расположив насос на выходной линии ротора. Такое расположение позволяет снижать турбулентность потока у основания разделительной камеры. При другой системе расположения контейнер с клетками устанавливается между насосом и входным устройством
ротора. При этом предотвращается прохождение клеток через головку насоса. Практика показывает, однако, что, судя по результатам определения жизнеспособности, прохождение клеток через колонку насоса не сопровождается их повреждением.
Предыдущая << 1 .. 65 66 67 68 69 70 < 71 > 72 73 74 75 76 77 .. 136 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed