Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
3.5.3. Культуральная система Оптицелл
Недавно фирмой К. С. Biological предложена новая культуральная система, в которой для роста клеток используется керамический материал. Она состоит из цилиндрического керамического патрона (поставляются варианты с рабочей поверхностью от 4,25 до 18 м2) с каналами площадью 1 мм2 по всей длине цилиндра. Систему дополняет перфузионный контур во внешний резервуар, где осуществляется контроль качества среды. Система обеспечивает высокое отношение рабочей поверхности к объему (40: 1), и результаты предварительных исследований показали пригодность этой системы для производства вирусов и поверхностных антигенов клеток.
3.5.4. Пластиковые мешки [11]
Мешки, изготовленные из фтор-этилен-пропиленового сополимера (ФЭП-Тефлон; Du Pont), биологически инертны, но характеризуются очень высокой проницаемостью для газов. Мешки размером 5x10 см, заполненные клетками и средой (толщина слоя 2—10 мм), могут быть помещены в термостат. Система обеспечивает достаточное снабжение культуры кислородом (клетки растут внутри мешка и отделены от воздуха мембраной толщиной 25 мкМ), что позволяет получить высокую плотность клеток. Культуру можно помещать на качалку или вращать для поддержания гомогенности среды. Клетки можно снимать обычной трипсинизацией либо механически, путем выворачивания мешка и соскребания клеток.
3.5.S. Культиввтор с пластиковой пленкой IL-410 [12]
Этот метод использует тот же самый материал (ФЭП-Теф-лон), но не в виде мешков, а в виде длинных трубок, накрученных с прокладками на катушку. Среда прокачивается через трубки и может либо удаляться, либо рециркулировать через, внешний резервуар. Газообмен между средой и воздушным пространством термостата осуществляется через стенки трубок. Длина используемых трубок может достигать 10 м, а их рабочая поверхность, пригодная для роста клеток, составляет 25 ООО см2.
3.5.6. Пластинчатый теплообменник
Пластинчатый теплообменник обладает большой рабочей поверхностью из нержавеющей стали; при этом обеспечивается достаточная циркуляция среды на одной стороне листов и теплой воды (37°С) на другой стороне поверхности роста клеток. Система поставляется фирмой AVP в виде блоков с рабочей поверхностью 2 м2 [13].
3.6. Наращивание клеток; этап 4, системы ферментёров
Существуют три основные системы, которые можно отнести к ферментационным (суспензионные культуры) аппаратам (см. рис. 3.6).
а) Клетки неподвижны, среда перемещается (например, реактор со стеклянными бусами).
б) Гетерогенное перемешивание (например, реактор со стопой пластин).
в) Гомогенное перемешивание (например, микроносители).
Таблица 3.2. Свойства стеклянных бус с диаметром 3 мм
Вес (г) 0,0375
Площадь поверхности (см2) 0,283
Объем (см3) 0,015
Упаковочный объем (см3) 0,028
Таким образом, культура с рабочей поверх
ностью 10 000 см2 имеет следующие парамет
ры:
Количество стеклянных бус 35 336
Общий объем 990 мл
Объем среды 460 мл
Относительная площадь поверхности 21 см2/мл
Типичный размер культурального сосуда 20X8 см
3.6.1. Реактар с* стеклянными бусами
Использование для выращивания клеток подложки из стеклянных бус диаметром 3—5 мм, сквозь котирую непрерывно протекает среда, неоднократно упоминалось многими исследователями начиная с 1962 г. Принципиальная возможность такой системы для увеличения масштабов культивирования клеток была показана Вайтсидом и Спиром [14], которые использовали систему с емкостью 100 л для выращивания клеток ВНК.21 и FMDV.
Бусы диаметром 3 мм располагают достаточно плотно, чтобы предотвратить смещение упакованных бус; при этом существенно обеспечить протекание среды через колонку с такой
Загл/шка для отбора образцов'
Стеклянная колонка
Стеклянные Бусы диаметром Змм
Резервуар NaOH "
Насос
Среда
ftSMi
Воздушный фильтр
Выход газа
pH электрод -Вход газа
Заглушка для отвора образцов
Резервуар для среды
Мешалка
Заглушка для слива Перистальтический насос
Рис. 3.7. Система культивирования на стеклянных бусах.
скоростью, которая не вызывает механического повреждения клеток. Физические свойства стеклянных бус приведены в табл.
3.2, и эти данные позволяют рассчитать необходимые параметры системы культивирования. Система может быть создана в лабораторных условиях (см. рис. 3.7). На этом рисунке среда перемещается с помощью перистальтического насоса, но может быть также использован воздушный лифт, что обеспечивает лучшую оксигенацию. Среда может поступать либо сверху, либо снизу колонки, что не влияет на- результаты культивирования.
