Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
V. Профильтруйте раствор через 2—3 слоя стерильной марли.
VI. Разведите полученный раствор в 20 раз бидистиллирован-ной водой.
VII. Покройте раствором дно пластиковой чашки и высушите на воздухе (1—2 дня при температуре, не превышающей
37 °С).
VIII. Чашки можно хранить во влажной атмосфере при 4°С в течение нескольких месяцев.
Исходный маточный раствор коллагена может быть также нейтрализован и разведен культуральной средой. В этом случае коллаген образует гель благодаря повышенным значениям pH и концентрации солей. Денатурированный (высушенный на воздухе) коллаген облегчает прикрепление клеток (например, клеток эндотелия и скелетных мышц), а нативный (неденату-рированный) коллаген может оказаться необходимым для правильной фенотипической экспрессии.
6.3. Покрытие поверхности культуральной посуды фибронектином
Фибронектин может быть получен по методу Обринка [18] из свежей плазмы человека, не обработанной гепарином, и в условиях подавления протеолитической активности фенилметил-
сульфонилфторидом. Можно использовать также коммерческие препараты фибронектина фирм BRL, Collaborative Research или Gibco. Фибронектин используется в количестве 1—5 мкг на
1 см2 поверхности культуральной посуды.
I. Растворите при осторожном помешивании 20 мкг лиофили-зованного фибронектина в 1 мл бидистиллированной воды.
II. Покройте полученным раствором дно чашки диаметром 35 мм и высушите на воздухе при 40 °С.
III. Тщательно промойте чашки дистиллированной водой и опять высушите на воздухе.
IV. Готовые чашки можно хранить при комнатной температуре в течение нескольких месяцев.
Литература
1. Freshney R. I. (1983). Culture of Animal Cell — A Manual of Basic Technique, Alan Liss, Inc., NY, p. 74.
2. Ham R. G., McKeehan W. L. (1979). in Methods in Enzymology, Vol. 53, Jacoby W. B., Pastan I. H. (eds.), Academic Press, NY, p. 44.
3. Bottenstein J., Hayashi /., Hutshing S., Masui H., Mather I., McClure D. B.,
Ohasa S., Rizzino A., Sato G., Serrero G., Wolfe R., Wu R. (1979). in Methods
in Enzymology, Vol. 53: Cell Culture, Jacoby W. B., Pastan I. H. (eds.), Academic Press, NY, p. 94.
4. Barnes D„ Sato G. (1980). Anal. Biochem., 102, 255.
5. Barnes D., Sato G. (1980). Cell, 22, 649.
6. Sato G. H„ Pardee A. B., Sirbasku D. A. (eds.) (1982). Growth of Cell in Hormonally Defined Media, Cold Spring Harbor Conf. Cell Prolif., Vol. 9, Book A and B, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY.
7. Ham R. G. (1981). in Tissue Growth Factors, Baserda R. (eds.), Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 57, p. 13.
8. Ham R. G. (1983). in Hormonally Defined Media, Fischer G., Wieser R. J. (eds.), Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, NY, Tokyo, p. 16.
9. Fischer G., Wieser R. J. (eds.) (1983). Hormonally Defined Media, Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, NY, Tokyo.
10. Brandshaw R. A., Rubin J. S. (1980). J. Supramol. Struct., 14, 183. Contr. Cell Div. Dev. Part A: 193—209.
11. Iscove N. (1982). First Europ. Conf. Serum-Free Cell Culture, Heidelberg.
12. Ali-Osman F„ Maurer H. R. (1983). J. Cancer Res. Clin. Oncol., 106, 17.
13. Bilrk R. R. (1983). in Hormonally Defined Media, Fischer G., Wieser R. J. (eds.), Springer-Verlag, Heidelberg, p. 57.
14. Pierschbacher M. D„ Ruoslahti E. (1984). Nature, 309, 30.
15. Maurer H. R. (1981). Cell Tissue Kinetics, 14, 111.
16. Cleveland W. L., Wood /., Erlanger B. F. (1983). J. Immunology Methods, 56, 221.
17. McHugh Y. E., Walthall В. I., Steimer K- S. (1983). Biotechniques, June/ July, p. 72.
18. Obrink,B. (1982). In: Methods in Enzymology, Vol. 82, Cunningham L. W„ Fredericksen D. W. (eds.), Academic Press, NY, p. 513.
19. Strom S. C., Michalopoulos G. (1982). in Methods Enzymology, Vol. 82, Cunningham L. W., Fredericksen D. W. (eds.), Academic Press, NY, p. 544.
20. Clark J. (1983). in Hormonally Defined Media, Fischer G., Weiser R. J. (eds.), Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, NY, Tokyo, p. 6.
21. McKeehan W. L.. McKeehan K- A.. Hammond S. L., Ham R. C. (1977). In vitro, 13, 399.
22. Jennings S. D., Ham R. G. (1981). In Vitro, 17, 238 (abstract No. 155).
23. Adolphe М., Ronot Z., Froger B., Corvol М. Т., Forest N. (1983). in Hormonally Defined Media, Fischer G., Wieser R. J. (eds.), Springer-Verlag, Berlin, Heidelberger NY, Tokyo, p. 377.
24. Chaproniere-Rickenburg D. М., Weber М. M. (1982). Cold Spring Harbor Conf. Cell Prolif., 9, 1109.
25. Bunge R. P., Carey D. J., Higgins D., Eldridge C., Roufa D. (1983). in Hormonally Defined Media, Fischer G., Wieser R. J. (eds.), Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, NY, Tokyo, p. 178.
26. Fischer G. (1983). in Hormonally Defined Media, Fischer G., Wieser R. J. (eds.), Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, NY, Tokyo, p. 189.
27. Honegger P., GUntert B. (1983). in Hormonally Defined Media, Fischer G., Wieser R. J. (eds.), Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, NY, Tokyo, p. 203.
28. Lang E., Lang K-, Krause U., Racke K, Nitzgen B., Brunner G. (1983). in Hormonally Defined Media, Fischer G., Wieser R. J. (eds.), Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, NY, Tokyo, p. 250.
