Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Конки Д. -> "Культура животных клеток" -> 17

Культура животных клеток - Конки Д.

Конки Д., Эрба Э., Френши Р., Гриффитс Б. Культура животных клеток — М.: Мир, 1989. — 333 c.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка): kulturajivotnihkletok1989.djvu
Предыдущая << 1 .. 11 12 13 14 15 16 < 17 > 18 19 20 21 22 23 .. 136 >> Следующая

3. Замена сыворотки в среде
3.1. Общий подход
В настоящее время исследования по замещению сыворотки в культурах клеток развиваются по трем различным направлениям.
I. Аналитический подход. Выделение и идентификация сывороточных факторов, требующихся для выживания и роста клеток. Это чрезвычайно трудоемкая и зачастую бесперспективная задача, поскольку большинство гормональных факторов действует синергически и присутствует в сыворотке в минимальных количествах.
II. Синтетический подход Сато с сотрудниками [4]. Добавление в основную питательную среду различных комбинаций ростовых факторов, выполняющих функцию сыворотки: специфических и неспецифических для клеток гормонов (включая митогены), транспортных белков и факторов прикрепления и распластывания.
III. Метод, предложенный Хэмом с сотрудниками {2]. Метод основан на постепенном снижении концентрации сыворотки до остановки клеточной пролиферации. Затем концентрация каждого компонента питательной среды (витаминов, аминокислот, гормонов и т. п.) подбирается таким образом, чтобы размножение клеток возобновилось. Более подробное описание этого подхода приведено в публикациях Хэма с сотрудниками [2, 7].
3.2. Факторы, рассматриваемые перед выбором среды
3.2.1. Нормальные и трансформированные клетки
Исследователь, желающий получить культуру клеток в химически определенной бессывороточной среде, в первую очередь должен определить, к какой категории относятся культивируемые клетки:
I. Нетрансформированные (нормальные) или трансформированные?
II. Предназначена культура для выживания или для роста?
III. Гомогенна или гетерогенна клеточная популяция (например, смесь эпителиальных клеток с фибробластами) ?
IV. Исследуется дифферендировка или пролиферация?
При ответе на эти вопросы удобно пользоваться нижеприведенными формулировками, хотя следует иметь в виду, что перечисленные свойства не являются основными для каждой категории, поскольку стираются границы определений, встречаются и исключения из правил.
Нормальные, нетрансформированные клетки. Клетки, подобные таковым в интактном здоровом органе; отсутствие опухолерод-ности; эуплоидный (преимущественно диплоидный) кариотип; старение в культуре после ограниченного числа генераций. Трансформированные клетки. Злокачественность, анеуплоидный кариотип, отсутствие зависимого от плотности торможения роста в культуре, потеря зависимости от субстрата, опухолерод-ность (факультативная), пониженная потребность в сыворотке» неогранииченная продолжительность жизни.
Выживание. Поддержание жизнеспособности, морфологии; способность к метаболизму (факультативная) и потенциальная способность к дифференцировке.
Рост. Пролиферация или размножение клеток.
Обычно клетки из первичных эксплантатов здоровых тканей проявляют себя как нетрансформированные в течение первых генераций после выделения. Некоторые клетки остаются такими в течение 50 генераций и более. Такие нормальные клетки требуют обязательного присутствия в определенных количествах высокомолекулярных белков, гормонов и факторов роста даже при культивировании в улучшенных средах. Трансформированные клетки могут расти без ростовых факторов при условии обеспечения незаменимыми неспецифическими добавками. Появляется все больше данных о том, что опухолевые клетки способны стимулировать собственную пролиферацию, продуцируя аутокринные ростовые факторы.
3.2.2. Потребности ^трансформированных клеток
Культивируемые нетрансформированные клетки характеризуются потребностью в следующих факторах:
I. Факторы, не являющиеся специфическими для какого-либо типа клеток. Среди прочих сюда относятся: неорганические ионы (Na+, К+, Са2+, Mg2+ Fe2+, CI-, НС03- Р043-), С02, 02, pH, осмоляльность, температура, наличие углеводов, нуклеозидов, незаменимых аминокислот, -витаминов, неорганических микроэлементов (включая селенит), инсулина, трансферрина, глюко-кортикоидов и, возможно, соматомединов и инсулино-подобных ростовых факторов (ИРФ).
II. Факторы с некоторой (но не абсолютной) клеточной специфичностью. Примерами таких факторов могут служить ФРЭ, ФРФ, фактор роста нервов (ФРН), ФРСТ и гематопоэтические ростовые факторы (колониестимулирующие факторы, интерлейкины) .
Более того, оказалось, что некоторые факторы могут проявлять различные функции. Так, например, инсулин оказывается необходимым как для пролиферации, так и для дифферен-дировки.
3.2.3. Адгезия клеток к субстрату и биоматрикс [6]
Для пролиферации большинства типов нетрансформирован-ных клеток необходимо их предварительное прикрепление к твердому субстрату. Взаимодействие таких клеток со своим окружением определяет многие клеточные свойства. Кроме кроветворных клеток только трансформированные клетки способны размножаться без прикрепления к субстрату.
I. Субстраты. Подходящими субстратами для адгезии клеток могут служить поверхности стекла или специально обработанных пластических материалов, так называемые пластики для культуры ткани с модифицированным поверхностным зарядом. Тем не менее для роста и дифференцировки некоторых клеток, особенно эпителиальных клеток и нейронов, более удачным субстратом оказывается коллаген. Коллаген является главным компонентом внеклеточного матрикса, к которому прикрепляются клетки. Клетки связываются с субстратами не непосредственно, а с участием факторов адгезии. Наиболее распространенным и хорошо изученным фактором адгезии является фибронек-тин — белок, содержащийся в плазме и сыворотке. Фибронектин связывается с различными субстратами, а клетки прикрепляются к этому фактору с помощью специфических рецепторов фибронектина. Известны и другие факторы адгезии, такие как хондронектин, обеспечивающий адгезию хондроцитов, и лами-нин, участвующий в адгезии эпителиальных клеток. Некоторые типы клеток способны синтезировать коллаген, ламинин, гли-козаминогликаны и гликопротеины in vitro, формируя таким образом собственный внеклеточный матрикс. Внеклеточный матрикс в форме биоматрикса может быть выделен из различных тканей и добавлен к культуральным флаконам или чашкам. Недавно было показано [14], что связывающая активность фибронектина обусловлена тетрапептидом Arg-Gly-Asp-Se'r, являющимся частью домена, связывающегося с клетками.
Предыдущая << 1 .. 11 12 13 14 15 16 < 17 > 18 19 20 21 22 23 .. 136 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed