Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
ла; ДМЕ — МЕМ в модификации Дюльбекко; НМЕМ — ME с солевым буфером Хэнкса: руемый тромбоцитами.
фгктор роста эпидермиса; ФРФ — фактор роста фибробластов; ПГ — простагландины;
зом трансферрин незаменим для большинства культивируемых клеток, которые несут на своей поверхности специфические рецепторы для этого белка.
2.1.5. Липиды
Сыворотка является богатым источником различных липидов, необходимых культивируемым клеткам для выживания и роста. Линии клеток различаются по потребности в незамени-
мых жирных кислотах, фосфолипидах, лецитине и холестерине. Так, например, оптимальный баланс жирных кислот и холестерина варьирует в значительных пределах для различных линий кроветворных клеток и для одной и той же линии на разных стадиях созревания [11]. Было показано, что простагландины (ПГ) Е и Е2о вовлечены в регуляцию клеточной пролиферации и действуют совместно с ростовыми факторами, такими как ФРЭ.
2.1.6. Минеральные вещества
Роль присутствующих в сыворотке неорганических микроэлементов (Си, Zn, Со, Mn, Mo, Va, Se) выяснена далеко не полностью, но многие из них могут быть кофакторами ферментов. Так, например, ионы БеОз2- требуются для активации ряда ферментов метаболической детоксикации. Ионы селена могут также участвовать в инактивации свободных радикалов.
2.2. Возможные преимущества использования бессывороточных сред и сред с низким содержанием сыворотки
Использование таких сред обеспечивает следующие преимущества:
I. улучшение воспроизводимости результатов опытов на пассируемых культурах вследствие большей стабильности состава среды (свойства сыворотки могут меняться от партии к партии);
II. снижение риска заражения культуры вирусами, грибами, микоплазмой;
III. снижение стоимости (особенно в случае эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота);
IV. облегчение очистки продуктов клеточного метаболизма;
V. снижение влияния дополнительных белков на результаты биологических исследований;
VI. отсутствие цитотоксичности сыворотки;
VII. предотвращение многослойного роста фибробластов в первичной культуре;
VIII. селективное культивирование дифференцированных и функционально различающихся типов клеток из гетерогенной популяции первичной культуры без преимущественной стимуляции отдельных субпопуляций.
2.3. Некоторые недостатки использования сыворотки при культивировании клеток
Несмотря на сказанное выше, культивирование клеток в присутствии сыворотки обнаруживает ряд недостатков.
I. Для большинства клеток сыворотка не является физиоло-
гической жидкостью, с которой они контактировали в исходной ткани. Такой контакт мог осуществляться, однако, в процессах заживления ран и образования кровяных сгустков; при этом сыворотка вызывает рост фибробластов, но тормозит рост эпидермальных кератиноцитов '[7].
II. Часто недооценивается возможность цитотоксичности сыворотки. Помимо селективных ингибиторов, бактериальных токсинов и липидов сыворотка может содержать полиами-ноксидазу. Фермент действует на полиамины (спермин, спермидин), являющиеся продуктами секреции быстро пролиферирующих клеток, в результате чего образуются цитотоксические полиаминоальдегиды [12]. Эмбриональная сыворотка крупного рогатого скота и сыворотка беременных женщин в отличие от лошадиной сыворотки содержат относительно много этого фермента. Этим можно объяснить результаты исследований, в которых было показано супрессивное действие эмбриональной сыворотки и сыворотки беременных женщин.
III. Значительные изменения свойств сыворотки от партии к партии делают необходимым тщательный скрининг сывороток, что занимает много времени и дорого обходится.
IV. Сыворотки могут содержать недостаточное количество специфических для данных клеток ростовых факторов, что приводит к необходимости добавления этих факторов к; культурам клеток.
2.4. Возможные недостатки использования бессывороточных сред
I. Использование таких сред дает во многих случаях большую экономию, но необходимость добавления в среду гормонов и ростовых факторов может сделать бессыворо-точную среду такой же дорогой, как и среда с сывороткой.
II. Бессывороточная среда часто бывает пригодной лишь для одного типа клеток, так что при работе с несколькими линиями может возникнуть необходимость в разных вариантах бессывороточных сред.
2.5. Для чего нужна бессывороточная среда?
Каждый, кто использует культуру клеток в обычных лабораторных масштабах и нуждается в строгом контроле условий культивирования, может использовать бессывороточную среду, чтобы избежать вариабельности в количестве различных неи-дентифицированных компонентов в сыворотке.
Существуют две главные причины использования бессывороточных сред при работе с большим количеством клеток, на-
пример с гибридомами, продуцирующими моноклональные антитела, с фибробластами, синтезирующими интерферон, и с лим-фомами, секретирующими лимфокины и другие факторы. Эти причины: а) необходимость избежать присутствия чужеродного белка, от которого в противном случае придется очищать получаемый продукт и б) высокая стоимость эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота.
