Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 78

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 72 73 74 75 76 77 < 78 > 79 80 81 82 83 84 .. 246 >> Следующая


Первые пики, выходящие на самописце, обычно записывают на самой высокой чувствительности (это кислоты от 6 : 0 до 16 : 1— 17 : 1). Затем чувствительность загрубляют 2—8 раза (все зависит от концентрации метиловых эфиров и характера пробы) до выхода наиболее больших по размеру пиков (от 18 : 0 до 18 : 2). Затем чувствительность вновь повышают до максимума и на ней заканчивают запись остальных жирных кислот (от 18 : 3 до 20 : 4—22 : 0) (см. табл. 29). Если проводится анализ жирных кислот в липидах морских рыб, то после бегеновой кислоты (22 : 0) выходят 22 : 1, 22 : 5, 22 : 6, т. е. эруковая, докозапентаеновая и декозагексаеновая кислоты соответственно.

Поэтому нельзя отключать самописец ранее чем через 50—60 мин, а иногда выжидают и больше. Исследователь должен быть уверен, что все метиловые эфиры из анализируемой пробы вышли из колонки. Иначе колонка будет загрязняться и ухудшит разделение жирных кислот.

Если необходимо определить абсолютное количество жирных кислот, содержащихся в анализируемой пробе, то полученную

165

площадь каждого пика умножают на поправочный коэффициент. Для этих целей готовят растворы жирных кислот известной концентрации (например, 5—10 мг/мл) в гексане или хлороформе и известное (точно!) количество вводят в колонку. После неоднократного повторения выводят среднюю величину площади пика той или иной кислоты. Такие средние величины, полученные для разных доз, позволяют вывести графическую зависимость площади пика от дозы кислоты (табл. 30).

30. Пример расчета поправочного коэффициента

Код кислоты
В, мкг
77, мм2
П/В
К

16: 0
10
400
40
1,000

18: 0
10
540
54
1,350

18: 1
10
600
60
1,500

18: 2
10
390
39
0,975

18: 3
10
310
31
0,775

Для того чтобы рассчитать поправочный коэффициент (К), первоначально находят отношение площади пика (77) к массе вещества (В) — П/В. Затем полученную для каждого пика величину рассчитывают относительно этой же величины определенной жирной кислоты, чаще всего пальмитиновой, поправочный коэффициент которой берут за 1,0.

Источники: 6, 72.

3.3.7. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ПЕРЕКИСНОГО (СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО) ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ

Среди многочисленных показателей липидного обмена процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) играют важную роль не только в физиолого-биохимическом гомеостазе нормальной клетки, но и выступают как универсальное неспецифическое звено механизма развития различных патологических состояний организма.

ПОЛ — нормальный метаболический процесс, представленный во всех органах и тканях организма. Через стадию перекисных производных происходит биосинтез многих БАВ (простагланди-нов, гормонов и др.), а также регуляция активности ферментов. Равновесие свободнорадикальных процессов — основа нормального функционирования организма. Нарушение равновесия в сторону избыточного образования свободных радикалов связывают с ускоренным старением клеток, воспалительными процессами, стрессами, а пониженный уровень продуктов ПОЛ — с возможностью деструктивных перерождений клеток (С. Чевори и сотр., 1992).

ПОЛ представляет собой процесс непосредственного переноса кислорода на субстрат с образованием пероксидов, кетонов, альде-

166

гидов и других соединений. Реакция эта носит цепной самоиндуцирующий характер и возникает под воздействием активных форм

кислорода: O2 , O2 , НО, HO2 . Особой активностью обладает супероксидный анион (O2 ), который в организме может действовать как окислитель (акцептор электрона: O2 + е~ + 2H+ -» H2O2) с образованием пероксида водорода и как восстановитель (донор электрона: O2 +ё~ -> ё~ + O2) с образованием молекулярного кислорода. Этот процесс является определяющим звеном всей цепной реакции и от его скорости зависит скорость процесса в целом. Наиболее легко отрывается атом водорода от углерода, находящегося в а-положении по отношению к двойной связи в молекуле ненасыщенной жирной кислоты. В результате в молекулах жирнокис-лотных отстатков появляется система сопряженных двойных связей или конъюгированных диенов, которые легко взаимодействуют с кислородом с образованием пероксидных радикалов, а в дальнейшем и гидропероксидов. Это так называемые первичные продукты ПОЛ, которые крайне чувствительны к самым незначительным изменениям в составе компонентов окисления, концентрации его активаторов или ингибиторов.

Обладая высокой реакционной способностью, первичные продукты пероксидного окисления липидов повреждающе действуют на различные биомолекулы и в первую очередь на белки. Повреждающее действие липидных пероксидов и свободных радикалов на белковую молекулу реализуется за счет взаимодействия с SH-, NH2- и СНз-группами белков. Это является основой их инактиви-рующего действия на многие ферменты. Липидные пероксиды легко вызывают полимеризацию ферментов, увеличивают скорость потребления кислорода и разобщающе действуют на окислительное фосфолирирование в митохондриях. Первичные продукты ПОЛ разрушительно действуют не только на узловые ферменты гликолиза и цикл трикарбоновых кислот (ЦТК) в дыхательной цепи, но также и на основное макроэргическое соединение организма — АТФ.
Предыдущая << 1 .. 72 73 74 75 76 77 < 78 > 79 80 81 82 83 84 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed