Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Структура ЛП-комплекса, его липидный состав и обмен во многом определяются природой АПО, который активирует или тормозит соответствующие ферменты.
На основе неодинаковой относительной плотности при центрифугировании в растворах разной плотности или подвижности при электрофорезе в сыворотке крови млекопитающих различают четыре класса ЛП (табл. 23): хиломикроны (XM) — самый крупный по величине и самый легкий по относительной плотности класс. При центрифугировании флотирует по поверхности (d < 1,006), второй класс — ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП, d = = 1,006—1,019) или npe-?-ЛП. Затем идут ЛП низкой плотности (ЛПНП, d = 1,006—1,063) или ?-ЛП и ЛП высокой плотности (ЛПВП, d = 1,063-1,21), или а-ЛП.
При электрофорезе XM остаются на старте, подобно у-глобули-нам, ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП занимают положение ?, ар и
23. Состав и свойства липопротеидов
Класс
Плотность, г/мл
Диаметр частицы,
hm
Приблизительная молекулярная масса, х106
Состав, %
ФЛ
тг
XC
эх
Белок
XM
0,95-1,006
200-500
103-104
5-10
80
10
7
2
ЛПОНП
0,99-1,006
20-70
5-100
20
55
13
5
10
ЛПНП
1,006-1,063
—
2-3
22
11
45
37
21
ЛПВП
1,063-1,21
—
0,25
26
6
18
15
50
148
сх2-глобулинов соответственно. У птиц в сыворотке крови содержится только три класса ЛП, XM у них не обнаружены. Как видно из таблицы 23, XM и ЛПОНП переносят в крови преимущественно ТГ, ЛПОНП - XC и ЭХ, ЛПВП - ФЛ и ХЭ.
С изменением физиологического состояния организма животных меняется и роль отдельных классов ЛП в обмене липидов. Так, отмечено повышение концентрации ЛПОНП в сыворотке крови высокопродуктивных и жирномолочных коров, а у кур — в период пика яйцекладки.
В лабораторной практике из-за отсутствия доступных методов исследований роль ЛП в обмене веществ оценивают главным образом по сумме ?-липопротеидов (ЛПОНП + ЛПНП).
Принцип. В основе метода лежит реакция избирательного осаждения ?-липопротеидов декстрина сульфатом или гепарином в присутствии двухвалентных катионов.
Реактивы: 1,025 моль/л раствор MnCl2; 1%-ный раствор гепарина (1 мл должен содержать 1000 ME; продажный гепарин, содержащий 25 ООО ME в 5 мл, разводят дистиллированной водой 1 : 4).
Оборудование: ФЭК или спектрофотометр; пробирки; штатив для пробирок; стеклянные палочки; пипетки.
Ход определения. 2 мл 0,025 моль/л раствора MnCl2 вносят в пробирку и прибавляют 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают и определяют оптическую плотность пробы (Ey) на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 0,5 см при длине волны 700—720 нм (красный светофильтр) против воды. Затем в кювету добавляют 0,04 мл 1%-ного раствора гепарина. Пробы тщательно перемешивают стеклянной палочкой и строго через 10 мин повторяют фото-метрирование (E2). Разница E2 — Ey приходится на оптическую плотность, обусловленную осадком ?-липопротеидами. Умножая ее на коэффициент 1164 (определен расчетным способом), получают количество ?-липопротеидов в сыворотке крови в мг%.
Примечание. Кровь берут натощак. Сыворотка сохраняется 2 сут.
Клиническое значение. Основная часть липидов сыворотки крови представлена в виде гидрофильных комплексов а- и ?-липопротеидов. Ha долю ?-липопротеидов приходится 60—70 % всех липидов сыворотки крови. Печень является не только местом синтеза, но и активного катаболизма ЛП, а следовательно, и выведения из организма продуктов обмена липидов (холестерина). Поэтому определение их концентрации имеет важное клинико-физиологическое значение.
Повышение концентрации ?-липопротеидов в сыворотке крови отмечается при скармливании высокожировых кормов, при острых гепатитах, диабете, ожирении, гипотериозе, желтухах; снижение — чаще всего при длительном дефиците в рационе белка (протеина) или незаменимых липотропных аминокислот, когда нарушается синтез апопротеида.
Источник: 5, 8.
149
3.3.6.3. РАЗДЕЛЕНИЕ ЛИПИДОВ НА КЛАССЫ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (TCX)
Определение содержания отдельных классов липидов после их разделения методом TCX имеет ряд преимуществ перед описанным выше: во-первых, позволяет получить более точные данные, и, во-вторых, определение отдельных классов липидов можно автоматизировать и тем самым сократить время исследований.
Принцип. В основе метода лежит адсорбционная хроматография, которая основана на сорбции растворенного вещества твердой фазой — активным сорбентом. Подвижная фаза (растворитель разделяемой смеси веществ) движется по неподвижной фазе (сорбенту), и при этом разделяемые компоненты перемещаются с различной скоростью в направлении движения растворителя. В качестве сорбента для разделения липидов и фосфолипидов чаще применяют силикагель — соединение с общей формулой SiO2 • иН20. Адсорбирующие свойства силикагеля объясняются наличием группы —SiOH-, имеющей свободные водородные связи. Присутствие моно- или мультимолекулярных слоев адсорбированной воды ухудшает разделяющие свойства силикагеля. Поэтому нагревание (активирование) пластинки с силикагелем при 100—115 °С для удаления воды повышает разделяющую способность силикагеля.
