Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
При постановке реакции используют абсолютно чистые и совершенно сухие пипетки и пробирки. Соотношение ингредиентов реактива рассчитано так, что белки сыворотки не выпадают в осадок. Появление мути может быть вызвано только наличием воды в реактиве или посуде.
При исследовании холестерина в экстракте липидов его вносят в пробирку в объеме, содержащем не более 1—5 мг чистых липидов.
Клиническое значение. Холестерин в сыворотке крови животных находится в двух формах: свободной (1/3) и эфир-носвязанной с различными жирными кислотами (2/3). С возрастом концентрация холестерина (см. приложение 5) возрастает. Ги-перхолестеринемия отмечается при диабете, нефрозах, пониженной функции щитовидной железы; в начале голодания; у свиней и птицы — при скармливании рационов, обогащенных твердыми кормовыми жирами. При острых гепатитах уровень общего холестерина в начале заболевания обычно повышается, а затем падает ниже нормы. Для заболевания печени характерно падение эфирной фракции холестерина. Острое падение этой фракции в крови — плохой прогностический признак, указывающий на острую желтую атрофию печени или острое отравление ее.
Определение содержания этерифицированного холестерина в сыворотке крови (по Балаховскому). Принцип. Метод основан на связывании свободного холестерина дигитонином (благодаря чему образуется нерастворимое в хлороформе соединение) и рас-
146
творении хлороформом эфирносвязанного холестерина. Хлоро-форменный экстракт, содержащий эфирносвязанный холестерин, используется для цветной реакции с реактивом Илька (или с другим специфическим реактивом).
Реактивы: 1) экстрагирующая смесь (ЭС: хлороформ-метанол 2 : 1 или этанол-эфир 3:1);
2) 1%-ный спиртовой раствор дигитонина. 1 г дигитонина растворяют в 50 мл этилового спирта и доводят до 100 мл дистиллированной водой с подогревом;
3) смесь ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты (1:5:1). Готовят, как описано выше.
Оборудование: центрифужные пробирки; пробирки с притертыми пробками на 10 мл; пипетки на 0,1, 1 и 5 мл; штатив для пробирок; водяная баня; центрифуга; ФЭК или спектрофотометр.
Ход определения. 0,1 мл сыворотки (плазмы) крови вносят в центрифужную пробирку, содержащую 5 мл ЭС, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и оставляют стоять на 5—10 мин при использовании хлороформ-метаноловой смеси или на 1 ч при использовании спирто-эфирной смеси. Затем центрифугируют в течение 10—15 мин при 2000—3000 мин '. Центрифу-гат осторожно сливают в пробирку с притертой пробкой и ставят в водяную баню для выпаривания (не досуха, оставляют 0,5—1 мл центрифугата). Прибавляют 1 мл раствора дигитонина и перемешивают. Образуется белый налет — комплекс свободного холестерина с дигитонином. Оставляют стоять на 2—3 ч (или на ночь), после чего выпаривают досуха. После охлаждения в пробирку добавляют 5 мл хлороформа, тщательно взбалтывают. Хлороформен-ный экстракт фильтруют через обезжиренный бумажный фильтр или сливают после центрифугирования и используют для цветной реакции. С этой целью экстракт упаривают до минимума, добавляют 2 мл реактива 3, ставят в темное место на 20 мин, после чего колориметрируют. Хлороформ извлекает эфир холестерина, но не растворяет ни дигитонин-холестериновый комплекс, ни избыточный дигитонин.
Расчет ведут по калибровочной прямой, составленной для общего холестерина. По разности между общим и связанным находят количество свободного холестерина.
Клиническое значение. В норме доля эфирносвязанного холестерина в сыворотке крови животных достигает 70—90, у птиц 60—70 %. В результате все изменения его содержания отражают главным образом состояние печени и поджелудочной железы, где синтезируется эта фракция. Снижение данной фракции часто является следствием поражения синтетической функции печени и (или) поджелудочной железы.
Источник: 7.
10*
147
Определение содержания ?-липопротеидов в сыворотке (плазме) крови (по Бурштейну в модификации Виноградовой). Липопротеи-ды (ЛП) сыворотки крови играют важную роль в жизнедеятельности организма. Они обеспечивают транспорт липидов как экзогенного (кормового) происхождения, так и синтезированных в печени и стенке тонкого кишечника (т. е. эндогенного происхождения) в систему циркуляции и далее к местам утилизации или депонирования; входят в состав клеточных мембран и ферментов; обезвреживают токсины; влияют на функцию свертывания крови и т. д.
Важнейшей физиологической функцией отдельных ЛП (а-ЛП) является удаление избытка свободного холестерина из клеток периферических тканей и обратный транспорт их в печень, где он окисляется в желчные кислоты и с желчью через кишечник выводится из организма. Наконец, ЛП осуществляет транспорт жирорастворимых витаминов, в том числе обладающих антиоксидант-ной активностью (а- и у-токоферол, а- и ?-каротин, убихинон и др.), а также стероидные гормоны и другие БАВ.
ЛП представляют собой водорастворимые комплексы, состоящие из липидной — холестерина (XC), триацилглицерина (TX), фосфоли-пидной (ФЛ) и белковой части — аполипопротеида (АЛО). Соотношение белок : липид может колебаться в широких пределах. И чем больше размер ЛП, тем больше в ней липидная часть, значит, меньше относительная плотность и меньше подвижность при электрофорезе.
