Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Контроль. В перегонную колбу вносят 10 мл дистиллированной воды, 15 мл бихромата. Кипятят 25 мин. Титруют 0,01 моль/л раствором натрия тиосульфата, как описано выше.
Расчет ведут по формуле
X= (A-B)- 25,
где X — количество ?-оксимасляной кислоты, мл; А — количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на связывание свободного йода в контроле; В — количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на связывание свободного йода в опыте; 25 — коэффициент для перевода в мг%.
Примечания. 1. В лаборатории, где проводят определение кетоновых тел, должен быть чистый, свежий воздух. В этих условиях количество 0,01 моль/л раствора
9*
131
натрия тиосульфата, пошедшего на титрование контрольных проб, должно быть только на 0,1 — 0,15 мл меньше, чем было затрачено его при установлении титра 0,01 н. раствора йода, т. е. на 2 мл должно пойти не менее 1,85—1,90 мл. Проверяют чистоту воздуха следующим образом. Рядом с перегонным аппаратом ставят приемный стаканчик, в который внесено 5 мл дистиллированной воды, 2 мл 10%-ного раствора натрия гидроксида и 2 мл 0,01 н. раствора йода. Смеси дают постоять 20—30 мин, после чего приливают 2 мл 20%-ного раствора серной кислоты, 2—3 капли 1%-ного раствора крахмала и титруют 0,01 моль/л раствором натрия тиосульфата. Если в лаборатории воздух чистый, то на титрование пойдет около 1,85—1,90 мл раствора натрия тиосульфата, при его загрязнении — значительно меньше. 2. Определение кетоновых тел в молозиве (молоке) проводят по описанному выше методу. Предварительно готовят безбелковый фильтрат. Молозиво (молоко) обезжиривают центрифугированием при 3000 мин-1 в течение 30 мин. Пробу с молозивом (молоком) ставят в морозильную камеру холодильника на 20 мин, после чего осторожно отбирают 5 мл обезжиренной жидкости и определяют в ней кетоновые тела так же, как в крови. Экспресс-метод обнаружения ацетоновых тел в сыворотке (плазме) крови. При содержании в сыворотке крови ацетона, ацетоук-сусной кислоты в концентрации выше 10 мг/100 мл, что бывает при кетозе, их можно обнаружить с использованием специальных тест-пластин или реактива Лестраде, Ланге и др.
Состав реактива Лестраде: натрия нитропруссидного [Na2(Fe(NO)(CN)5 • 2H2O] 1 часть, аммония сульфата [(NH4)2S04] 20 частей, натрия карбоната безводного [Na2CO3] 20 частей. Компоненты мелко измельчают в фарфоровой ступке в однородный порошок, который помещают в склянку из темного стекла с пробкой. Хранят 1—2 мес.
Ход определения. На фильтровальную бумагу на кончике скальпеля наносят около 50 мг реактива Лестраде и смачивают его 2—3 каплями сыворотки (плазмы) крови. Через 40—60 с читают реакцию. Появление сиреневой окраски свидетельствует о наличии в сыворотке крови более 10 мг/100 мл ацетона и ацето-уксусной кислоты (такова степень чувствительности реактива). Чем интенсивнее окраска, тем больше ацетоновых тел в исследуемой жидкости. Высокая концентрация ацетоновых тел в крови, молоке и моче присуща кетозу.
132
Клиническое значение. Кетоновые (ацетоновые) тела — группа органических соединений (?-оксимасляная кислота, ацетоуксусная кислота и ацетон) — промежуточные продукты обмена жиров, углеводов и белков. Повышение уровня кетоновых тел в крови, моче, молоке и других биологических субстратах свидетельствует о нарушении углеводного, жирового и других видов обмена.
У здоровых животных содержание кетоновых тел в крови 1—8 мг/100 мл (0,17—1,3 ммоль/л), в молоке 6—8 мг/100 мл (1,03—1,36 ммоль/л), в моче 6—10 мг/100 мл (1,0—1,7 ммоль/л). Содержание ацетоуксусной кислоты и ацетона в крови составляет около 15 %, а ?-оксимасляной кислоты — 85 % общего количества кетоновых тел. (Пределы колебаний содержания кетоновых тел в крови здоровых животных см. в приложении 5.)
Характерный признак кетоза у коров и овцематок — гиперкето-немия, гиперкетонурия, гиперкетонолактия.
При кетозе, особенно в начальной острой стадии заболевания, содержание кетоновых тел в крови, молоке и моче резко повышается, главным образом за счет ацетоуксусной кислоты и ацетона. При затяжном течении болезни, потере аппетита и исхудании уровень кетоновых тел в крови падает и нередко не выходит за верхние пределы нормы, в то время как в начальный период болезни превышал ее в несколько раз (И. П. Кондрахин).
Умеренная вторичная кетонемия может быть при задержании последа, эндометрите, травматическом ретикулоперитоните, хирургической инфекции и других септических процессах.
Вторичная кетонемия (кетонурия) носит нестойкий характер и исчезает с устранением основного первичного заболевания. Кето-немию при кетозе устанавливают у многих животных в стаде, вторичная кетонемия встречается у единичных животных.
Источники: 52, 64.
3.3.6. МЕТОДЫ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА
Для оценки состояния липидного обмена в организме животных проводят ряд последовательных и взаимосвязанных операций, включающих следующие этапы: выделение липидов из исследуемых субстратов (сыворотки или плазмы крови, молока, яиц, органов, тканей и т. п.); количественное определение отдельных классов липидов без разделения их на классы или после разделения методом тонкослойной хроматографии (ТСХ); разделение фосфоли-пидов на подклассы; определение жирнокислотного состава общих липидов или отдельных классов (фосфолипидов, MOHO-, ди- и три-ацилглицеринов, неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК), эфиров холестерина и подклассов фосфолипидов (фосфатидилхо-лина, фосфатидилэтаноламина и др.) и другие показатели.
