Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
20%-ный раствор серной кислоты (по объему);
10%-ный раствор натрия гидроксида;
001 н. (0,005 моль/л) раствор йода. Готовят перед анализом из 0,1 н. раствора, приготовленного из фиксанала. Титр 0,01 н. раствора йода каждый раз проверяют по 0,01 н. (0,01 моль/л) раствору натрия тиосульфата (натрия серноватистокислого 5-водного, Na2SO3 •5H2O);
0,01 моль/л раствор натрия тиосульфата. Готовят из стандарт-титра последовательно, вначале 0,1 моль/л, а затем 0,01 моль/л;
1%-ный раствор крахмала. Готовят заранее насыщенный раствор натрия хлорида, наливают его в мерную колбу вместимостью 100 мл больше чем до половины, 1 г растворимого крахмала растворяют в пробирке в нескольких миллилитрах дистиллированной воды при нагревании, выливают в ту же колбу и доливают раствором натрия хлорида до метки. Раствор стоек, с йодом должен давать чисто-синее окрашивание.
Оборудование: приборы (перегонный аппарат, рис. 3) для определения кетоновых тел (20—30 шт.), монтируют в вытяжном шкафу; электроплитки (8—10 шт.); микробюретки на 2 и 5 мл; стаканчики химические на 75—100 мл.
Ход определения. Приготовление безбелкового фильтрата по Сомоджи. К 5 мл крови добавляют 25 мл дистиллированной воды, 10 мл 0,3 моль/л раствора натрия гидроксида, перемешивают, добавляют 10 мл 5%-ного раствора цинка сульфата, все тщательно взбалтывают и через 10 мин фильтруют через бумажный фильтр. Таким образом получим разведение крови 1:10.
Определение общего количества кетоновых тел. Непосредственно перед работой включают холодильник и аппарат просасывают 20 мин текучим паром, налив в перегонную колбу дистиллированную воду и добавив в нее немного пемзы для равномерного кипения.
В приемный стаканчик вносят 20 мл дистиллированной воды, 2 мл 0,01 н. (0,005 моль/л) раствора йода, 2 мл 10%-ного раствора натрия гидроксида и ставят под холодильник перегонного аппарата так, чтобы конец его погрузился в жидкость. В перегонную кол-
9 — 4196
129
Рис. 3. Перегонный аппарат для определения кетоновых тел
бу вносят 10 мл фильтрата крови, 15 мл бихроматной смеси и 10 мл дистиллированной воды.
Параллельно готовят контроль в двух аппаратах: в перегонную колбу вносят 20 мл дистиллированной воды и 15 мл бихроматной смеси. Приборы закрывают, соединяют холодильники с водопроводом, пускают воду и включают электроплитки. Опытные образцы кипятят 25 мин, контрольные — 15 мин. Затем отключают нагрев, снимают перегонную колбу, холодильник смывают небольшим количеством дистиллированной воды. Приемный стаканчик закрывают крышкой и ставят в темное место на 15—20 мин. По истечении указанного времени в приемный стаканчик быстро приливают 2 мл 20%-ного раствора серной кислоты, добавляют 2—3 капли 1%-ного раствора крахмала и титруют 0,01 моль/л раствором натрия тиосульфата до обесцвечивания.
Расчет ведут по формуле
X=(A-B)- 0,25 • 100,
где X — количество кетоновых тел, мг%; А — количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на титрование свободного йода в контрольной пробе, мл; В — количество 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата, пошедшего на титрование свободного йода в опытной пробе, мл; 1 мл 0,01 моль/л раствора йода связывает в данных условиях 0,25 мг ацетона; 100 — коэффициент перевода в мг%.
Определение ацетона и ацетоуксусной кислоты. В приемный стаканчик вносят 20 мл дистиллированной воды, 2 мл 0,01 моль/л раствора йода, 2 мл 10%-ного раствора натрия гидроксида и ставят
130
под холодильник перегонного аппарата. В перегонную колбу вносят 10 мл фильтрата крови, 1 мл 20%-ного раствора серной кислоты и 15 мл дистиллированной воды. Параллельно готовят два контроля: в перегонную колбу вносят 25 мл дистиллированной воды и 1 мл 20%-ного раствора серной кислоты. Закрывают систему, включают электроплитки и кипятят опытные образцы 25 мин, контроль 15 мин.
Последующий ход анализа такой же, как при определении общего количества кетоновых тел.
Расчет ведут по формуле
X=(A-B)-10,24,
где X — количество ацетона и ацетоуксусной кислоты, мл; А — количество 0,01 моль/л раствора тиосульфата натрия, пошедшего на связывание свободного йода в контроле, мл; В — количество 0,01 моль/л раствора тиосульфата натрия, пошедшего на связывание свободного йода в опыте, мл; 10,24 — коэффициент для перевода в мг%.
1 мл 0,01 н. раствора йода соответствует 0,1024 мг ацетона. Количество фильтрата в опыте соответствует 1 мл крови, поэтому связанное количество йода, умноженное на 10,24 (0,1024 • 100), будет соответствовать содержанию ацетона и ацетоуксусной кислоты в 100 мл крови.
Определение ?-оксимасляной кислоты. В приемный стаканчик вносят те же реактивы, что и для определения общего количества кетоновых тел, ставят его под холодильник. Перегонную колбу после отгонки ацетона и ацетоуксусной кислоты охлаждают и вносят в нее 15 мл бихроматной смеси (не сразу, а в два приема). Закрывают систему, подключают электроплитки. Кипение продолжается 20 мин. Необходимо следить, чтобы кипячение в колбе не прекращалось и жидкость не выкипала (не было потемнения бихромата). Если бихромат из воронки весь вылит, а жидкость выкипает, можно частями долить дистиллированную воду. По истечении 28 мин отсоединяют от холодильника приемную колбу, отключают нагрев. Перегонную колбу и холодильник промывают 4—5 мл дистиллированной воды. Приемный стаканчик ставят в темное место на 15 мин.
