Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Для построения калибровочных графиков используют растворы лактата и пирувата с разведением 1 : 8, обрабатывая их аналогично центрифугату. Концентрацию лактата и пирувата в крови рассчитывают путем умножения величин, полученных по калибровочным кривым, на коэффициент К.
Источники: 8, 16, 33.
Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. Принцип. При добавлении трихлоруксусной кислоты к сыворотке крови и нагревании происходит мягкий гидролиз гликопротеидов с отщеплением нейроминовой кислоты, которая затем вступает в реакцию с раствором резорцина в соляной кислоте с образованием хромогена синего цвета.
Реактивы: резорциновый реактив. Реактив готовят в мерной колбе на 100 мл. 200 мг резорцина растворяют в 10 мл дистиллированной воды, добавляют 80 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19) и 0,25 мл 0,1 моль/л раствора меди сульфата, смешивают, объем доводят дистиллированной водой до 100 мл. Реактив можно использовать через 4 ч после приготовления. Годен в течение 1 мес при хранении в холодильнике;
реактив для экстракции. 85 мл бутилацетата смешивают с 15 мл бутилового спирта;
5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты;
основной калибровочный раствор. 50 мг%-ный водный раствор N-ацетилнейраминовой кислоты. 0,5 мг кристаллической N-аце-тилнейраминовой кислоты (мол. масса 309) растворяют в 1 мл воды. 1 мл основного калибровочного раствора содержит 0,5 мг N-ацетилнейраминовой кислоты.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; водяная баня.
Ход определения. К0,1мл сыворотки или плазмы крови добавляют 1,9 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 7 мин (точно). Охлаждают в проточной воде до комнатной температуры, фильтруют через бумажный фильтр. К 0,5 мл прозрачного фильтрата (соответствует 0,025 мл сыворотки) добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. В каждую пробирку вносят по 1 мл резорцинового реактива, закрывают стеклянными пробками и помещают на 15 мин в кипящую водяную баню (пробирки закрывают пробками для уменьшения испарения), охлаждают проточной водой, добавляют по 3 мл раствора для экстракции, встряхивают, оставляют на 15 мин для расслоения фаз. Верхний окрашенный слой отсасыва-
127
ют и измеряют на ФЭКе при длине волны 575—590 нм (желтый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см против контроля.
Контроль. К 1 мл дистиллированной воды прибавляют 1 мл резорцинового реактива, помещают на 15 мин в кипящую водяную баню, охлаждают в проточной воде до комнатной температуры, добавляют 3 мл раствора для экстракции, встряхивают, отсасывают верхний слой, который используют в качестве контроля.
Для построения калибровочного графика готовят разведения (рабочий раствор) из основного калибровочного раствора N-аце-тилнейраминовой кислоты (табл. 19).
19. Разведения для построения калибровочного графика
Основной раствор ./V-ацетилнейрамино-вой кислоты, мл
Вода, мл
Содержание в 1 мл
Концентрация в плазме
mkt
ммоль
мг/л
ммоль/л
0,1
0,9
50
162
200
0,65
0,2
0,8
100
324
400
1,29
0,3
0,7
150
485
600
1,94
0,4
0,6
200
647
800
2,59
0,5
0,5
250
809
1000
3,24
Из каждого рабочего калибровочного раствора с указанной концентрацией берут по 1 мл, добавляют по 1 мл резорцинового реактива и далее обрабатывают так же, как опытные пробы. Расчет ведут по калибровочному графику.
Клиническое значение. Сиаловые кислоты являются N-ацетильными производными нейраминовой кислоты, играющей важную роль в качестве строительных блоков структурных полисахаридов. Нейраминовая кислота представляет собой производное девятиуглеродной сахарной кислоты. Ее можно рассматривать как продукт присоединения шестиуглеродного аминосахара к трехуг-леродной сахарной кислоте. Нейраминовая кислота и ее производные — сиаловые кислоты в свободном состоянии присутствуют в крови, ликворе, слюне и других биологических субстратах.
Содержание нейраминовых кислот в сыворотке крови резко возрастает при многих инфекционных заболеваниях, раковых опухолях, лейкозах, дистрофических и воспалительных процессах в почках (нефроз, нефрит) и печени (гепатоз), а также при поражении соединительной ткани (коллагенозы) и сердечной мышцы.
Источник: 43.
Определение кетоновых тел в крови йодометрическим методом.
Принцип. Из безбелкового фильтрата перегоняют свободный ацетон и ацетон, образовавшийся из ацетоуксусной и ?-оксимасля-ной кислот, прибавлением хромовой смеси и кипячением. В дистилляте определяют весь перегнанный ацетон, связывая его прибавлением йода и щелочи. Ацетон с йодом в щелочной среде об-
128
разует йодоформ и натрия йодид. Избыток йода освобождают прибавлением серной кислоты и определяют при помощи титрования раствором натрия тиосульфата. По разности между контролем и опытом определяют связанный йод.
Реактивы: 0,3 моль/л раствор натрия гидроксида;
5%-ный раствор цинка сульфата (ZnSO4 • 7H2O);
бихроматная смесь: 20 г двухромовокислого калия, 200 мл концентрированной серной кислоты, дистиллированная вода до 1 л. В мерную колбу на 1 л вливают 400—600 мл дистиллированной воды, осторожно приливают 200 мл серной кислоты и, постоянно помешивая, 20 г мелкоистолченного калия двухромовокислого. После растворения вещества и остывания реактива доливают водой до метки;
