Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
В пробирку вносят 5 мл прозрачного фильтрата (центрифугата) крови, 5 мл реактива Сомоджи, тщательно перемешивают и помещают на 15 мин (точно) в кипящую водяную баню. Охлаждают до комнатной температуры. После охлаждения содержимое пробирки подкисляют 2,5—3,0 мл 2 н. раствора серной кислоты. Чтобы под-кисление пробы произошло одновременно, рекомендуется добавлять кислоту быстро, встряхивая пробирку. Затем в пробирку вносят 2—3 капли 1 %-ного раствора крахмала, перемешивают. Титруют из микробюретки 0,005 н. раствором гипосульфита до
120
исчезновения синей окраски. Контроль делают как опыт, но вместо фильтрата крови берут 5 мл дистиллированной воды. Расчет ведут по формуле
X=(A-B)- 30,
где X — концентрация глюкозы, мг%; А — количество 0,005 н. раствора гипосульфита, затраченного на титрование контрольной пробы, мл; В — количество 0,005 н. раствора гипосульфита, затраченного на титрование опытной пробы, мл; 30 — коэффициент для пересчета в мг%.
При пересчете мг% в ммоль/л полученную величину умножают на 0,0555. Ошибка метода составляет ±5 %. Источник: 52.
Клиническое значение. Глюкоза — главный источник энергии для клеток организма. На ее долю приходится более 90 % всех низкомолекулярных углеводов.
Относительно постоянный уровень глюкозы в крови поддерживается благодаря сахароснижающему свойству инсулина и сахаропо-вышающему свойству адреналина, глюкогона и глюкокортикоидов.
Концентрация глюкозы в венозной крови на 10 % меньше, чем в капиллярной, она быстро снижается благодаря гликолизу. Поэтому глюкозу в крови определяют сразу после ее взятия или проводят осаждение белков трихлоруксусной кислотой непосредственно на ферме или добавляют ингибитор.
Нормативы глюкозы в крови животных приведены в приложениях 4—7.
Снижение сахара в крови (гипогликемия) бывает при кетозе, вторичной остеодистрофии, послеродовом парезе, некоторых формах ожирения, токсических поражениях печени. Часто оно следствие недостатка в кормах легкоусвояемых углеводов, большой потребности в глюкозе при высококонцентратном типе кормления, преобладании в рационах кислых кормов. К гипогликемии приводят передозировки инсулина.
Повышение сахара в крови (гипергликемия) может быть стойким и непродолжительным — при скармливании скоту больших количеств сахаристых кормов, а также при испуге, высокой температуре, стрессовом состоянии. Стойкая гипергликемия бывает при сахарном диабете. Однако следует иметь в виду то обстоятельство, что при сахарном диабете, сопровождаемом выраженной глюкозу-рией, содержание глюкозы в крови может быть в пределах нормы. Это обусловлено понижением почечного порога (ослабление реаб-сорбции глюкозы в почечных канальцах).
В моче здоровых животных глюкозу, как правило, не обнаруживают. Появление ее в моче (глюкозурия) бывает при сахарном диабете, когда уровень глюкозы в крови превышает пороговую концентрацию. Почечный порог глюкозы в крови у собак 6,66 ммоль/л.
Почечную глюкозурию отмечают при снижении почечного порога вследствие дистрофии почечных канальцев даже при нор-
121
мальной концентрации глюкозы в крови. Это так называемый «почечный» диабет.
Определение пировиноградной кислоты по модифицированному методу Фреедмана и Хаугена. Принцип. Пировиноградная кислота при добавлении 2,4-динитрофенилгидрозина превращается в 2,4-динитрофенилгидрозон пировиноградной кислоты, который очищается от примесей гидрозонов и других кетокислот последовательной экстракцией содовым раствором. 2,4-динитрофенилгидрозон образует со щелочью соединение коричнево-красного цвета, интенсивность которого определяют на фотометре.
Реактивы: 7,5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты. Готовят небольшое количество, хранят в холодильнике. Старые растворы использовать нецелесообразно;
толуол чистый (перегнанный);
0,1 %-ный раствор 2,4-динитрофенилгидрозина в 2 моль/л растворе соляной кислоты. 100 мг 2,4-динитрофенилгидрозина растворяют в 100 мл 2 моль/л раствора соляной кислоты. Кислоту добавляют небольшими порциями и нагревают на водяной бане до полного растворения 2,4-динитрофенилгидрозина. Раствор фильтруют и хранят в холодильнике в склянке из темного стекла;
10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты;
10%-ный раствор натрия карбоната;
1,5 моль/л раствор натрия гидроксида;
2 моль/л раствор соляной кислоты;
основной раствор пировиноградной кислоты. 20 мг пировиноградной кислоты или 25 мг натрия пировинограднокислого растворяют дистиллированной водой в мерной колбе на 100 мл;
стандартный 1 мг%-ный раствор пировиноградной кислоты. Готовят перед анализом из основного раствора; 5 мл основного раствора пировиноградной кислоты или натрия пировинограднокислого в мерной колбе доводят дистиллированной водой до 100 мл.
Оборудование: ФЭК; химические пробирки с притертой пробкой; водяная баня.
Ход определения. Осаждение белков крови. Для получения цельной крови в качестве стабилизатора (антикоагулянта) используют натрия фторид из расчета 100 мг на 10 мл крови. 3 мл только что взятой стабилизированной крови вносят в центрифужную пробирку, затем медленно (по каплям) прибавляют 3 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Содержимое пробирки тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Пробирку помещают на 10 мин в баню со льдом для лучшего осаждения белка, после чего центрифугируют 10 мин при 3000 мин-1. Надоса-дочную жидкость осторожно сливают в чистую пробирку и используют для определения пировиноградной и молочной кислот. Хранят в банке со льдом.