Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
18. Схема постановки реакции для определения билирубина
Реактив, мл
Контроль для общего билирубина, мл
Общий билирубин, мл
Контроль для связанного билирубина, мл
Связанный билирубин, мл
Разведенная сы-
0,5
0,5
0,5
0,5
воротка 1: 1
Кофеиновый ре-
1,75
1,75
—
—
актив
0,9%-ный раствор
0,25
—
2
1,75
NaCl
Диазосмесь
—
0,25
—
0,25
Из показателя оптической плотности проб общего и связанного билирубина вычитают показатель оптической плотности контрольных проб и по калибровочному графику определяют содержание общего и связанного билирубина в мг/100 мл сыворотки крови или в мкмоль/л, а по разнице между ними — содержание свободного (неконъюгированного) билирубина.
Источник: 20.
Клиническое значение. Билирубин — желчный пигмент, образуется в клетках ретикулоэндотелиальной системы печени и селезенки при распаде гемоглобина, миоглобина, ци-тохромов. Он ядовит, плохо растворим в воде. При поступлении с кровью в печень в гепатоцитах происходит обезвреживание его пу-
112
тем присоединения глюкуроновой кислоты. Соединения билирубина с глюкуроновой кислотой (моно- и диглюкурониды) растворимы в воде и непосредственно реагируют с диазореактивом. В этих соединениях заключен так называемый прямой (связанный) билирубин, который выделяется в желчь и поступает в кишечник, где превращается в уробилиноген.
В сыворотке крови животных содержится билирубин, связанный с глюкуроновой кислотой, или прямореагирующий, и конъ-югированный свободный непрямореагирующий билирубин.
Повышение содержания билирубина в сыворотке крови (гиперби-лирубинемия, желтуха) отмечается при гепатите, циррозе печени, острой токсической гепатодистрофии, опухолях печени. При этих болезнях увеличивается уровень в крови как несвязанного (свободного), так и связанного (конъюгированного) билирубина. При гемолитической желтухе, обусловленной гемолитическими ядами или кровопаразитами (протозоо), концентрация билирубина в крови повышается в основном за счет свободного (несвязанного) билирубина. В последнее время разделению билирубина на фракции в клинике не придают особого значения, оценивают в основном количество общего билирубина.
Коллоидно-осадочные пробы. Для оценки белковосинтетизиру-ющей функции печени, диагностики и прогнозирования бронхопневмонии и других патологических состояний широко используют осадочные пробы. Применение их основано на изменениях коллоидной устойчивости белков в сыворотке крови.
У здоровых животных белки в сыворотке крови находятся в коллоидном состоянии и отличаются высокой устойчивостью. При многих заболеваниях изменяется белковый спектр сыворотки крови, наступает диспротеинемия — снижение содержания альбуминов и повышение количества глобулинов, вследствие чего коллоидная устойчивость белков сыворотки крови снижается, под действием определенных веществ наступает преципитация, приводящая к помутнению.
Предложено много осадочных проб с применением реакции Токата (пробы Токата, Гросса, сулемовая); тимоловая проба; кофеин-холестериновая проба; цинк-сульфатная проба; реакция Валь-тмана; золото-коллоидная проба; проба с сульфатом меди и др.
Хотя осадочные пробы не специфические, однако позволяют устанавливать степень нарушения соотношений между альбуминами и глобулинами сыворотки крови. Положительные коллоидно-осадочные пробы чаще обусловлены увеличением содержания глобулинов и уменьшением количества альбуминов. Ускорение коллоидно-осадочных реакций наблюдается также вследствие увеличения грубодисперсных белков —у-глобулинов при нормальном коэффициенте альбуминов (глобулинов).
8 — 4196
113
Осадочные пробы в сочетании с данными клинического состояния животных, наличием признаков заболевания печени, легких или других органов — ценные диагностические тесты.
Сулемовая проба. Принцип. Сулема в присутствии мелкодисперсных коллоидов (белков) образует коллоидный раствор солей ртути. Нарушение дисперсности белковых фракций сыворотки крови вызывает осаждение грубодисперсных частиц.
Реактивы: при исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота 100 мг двухлористой ртути растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл (100 мг%-ный). При исследовании сыворотки крови кур и лошадей берут 600 мг сулемы, растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл (600 мг%-ный);
натрия хлорид, 154 ммоль/л (0,9%-ный). 9 г соли растворяют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1 л.
Оборудование: микробюретка на 2 или 5 мл с оттянутым носиком; стаканчики на 50 мл.
Ход определения. В стаканчик вносят 1 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида и 0,5 мл сыворотки крови, перемешивают. Из микробюретки (или пипетки) медленно, по каплям с интервалом 20—30 с титруют до стойкого помутнения, при котором через вертикальный слой жидкости нельзя прочитать газетный текст. Результат выражают в мл раствора сулемы, пошедшего на титрование.
Источник: 43.
Примечание. Концентрация раствора сулемы для сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей и кур нами (И. П. Кондрахин) подобрана опытным путем.