Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
4. Колориметрия. Оптическую плотность пробы измеряют на ФЭКе при длине волны 536 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5 мм против контроля или дистиллированной воды.
Расчет. По калибровочной кривой, построенной по азоту аланина или другой какой-либо аминокислоты с известным содержанием азота (кроме триптофана, лизина, цистина), находят количество мкг азота, соответствующее полученным значениям экстинк-ций.
Для перевода в мг% найденный результат умножают на 200 и делят на 1000, т. е. умножают на 0,2 (в случае, если берут 0,5 мл сыворотки).
Пример: экстинкция пробы составляет 0,212, а количество азота, найденное по калибровочной кривой, — 16,42 мкг. Отсюда концентрация аминного азота представляет величину 16,42 • 0,2 = 3,284 мг% аминного азота.
103
Аналогичный результат можно получить при следующей пропорции:
0,5 мл сыворотки — 16,42 мкг 100 мл сыворотки — х,
X = (16,42 • 100) : 0,5 = 3284 мкг% = 3,284 мг%.
Клиническое значение. У здоровых животных в сыворотке (плазме) крови содержится от 4 до 8 мг% свободного аминного азота.
Снижается количество аминного азота при длительном недокорме, голодании, нефрозе, хронических расстройствах функций желудочно-кишечного тракта, при жировой дистрофии печени вследствие кетоза.
Повышается уровень аминного азота в крови после приема богатого протеином корма, острой токсической дистрофии печени (печеночной коме), отравлении фосфором и другими ядами, лихорадке.
Источник: 32.
Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом. Для определения мочевой кислоты в сыворотке крови используют колориметрические, энзи-матические и другие методы. Наиболее специфичные и точные — ферментативные (уреазные) методы, однако их выполнение затруднительно, поэтому в качестве унифицированного метода в клинико-диагностических целях используется фосфорно-вольфра-мовый карбонатный метод.
Принцип. Мочевая кислота восстанавливает фосфор-но-вольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты.
Реактивы: серная кислота (ч. д. а., х. ч.), 0,35 моль/л. К 200 мл дистиллированной воды добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты (плотность 1,84) и доводят объем водой до 500 мл;
натрий вольфрамовокислый двухводный (Na2WO4 • 2H2O, ч. д. а.), 100 г/л. Растворяют 50,0 г вольфрамовокислого натрия в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до 500 мл;
натрия карбонат (Na2C03, ч. д. а.), 103 г/л. Растворяют 51,5 г натрия карбоната в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до 500 мл;
85%-ная ортофосфорная кислота (ч. д. а.);
лития сульфат (Li2SO4 • H2O, ч. д. а.);
лития карбонат (Li2CC^, ч. д. а.);
фосфорно-вольфрамовый реактив. В круглодонную колбу вместимостью 1,5 л вносят 40,0 г вольфрамовокислого натрия и 300 мл дистиллированной воды. Добавляют 32 мл 85%-ной ортофосфор-ной кислоты и несколько стеклянных бусинок. Осторожно кипя-
104
тят в течение 2 ч на песочной или глицериновой бане с обратным холодильником. Охлаждают до комнатной температуры и доливают дистиллированной водой до 1 л. Добавляют 32,0 г лития сульфата. Раствор стабилен при хранении в холодильнике;
мочевая кислота (имп.);
формалин, не менее 37,5 % формальдегида;
основной калибровочный раствор мочевой кислоты, 6 ммоль/л. Растворяют 0,6 г карбоната лития в 150 мл дистиллированной воды, фильтруют и нагревают до 60 °С. Взвешивают 1,017 г мочевой кислоты, вносят в предварительно нагретую мерную колбу вместимостью 1 л, вливают теплый раствор лития карбоната и быстро встряхивают. После растворения мочевой кислоты колбу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 20 мл раствора формалина, наливают 300—350 мл дистиллированной воды. Добавляют несколько капель раствора метилового оранжевого, затем встряхивают, медленно добавляют 20—22 мл 0,35 моль/л серной кислоты до появления розового цвета. Доливают колбу до метки дистиллированной водой. Раствор стабилен при хранении в холодильнике в посуде из темного стекла. 1 мл раствора содержит 0,006 ммоль/1 мг мочевой кислоты;
рабочий калибровочный раствор мочевой кислоты, 0,3 ммоль/л. 5 мл основного калибровочного раствора в мерной колбе доводят до 100 мл дистиллированной водой. Стабилен в течение 2 нед при хранении в холодильнике.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; баня песочная или глицериновая; обратный холодильник.
Ход определения. Опытная проба. К 8 мл дистиллированной воды прибавляют 1 мл сыворотки, 0,5 мл 0,35 моль/л серной кислоты и перемешивают. Добавляют 0,5 мл раствора вольфрамово-кислого натрия и тщательно перемешивают. Через 5—10 мин фильтруют. К 3 мл фильтрата добавляют 1,5 мл раствора натрия карбоната, перемешивают. Затем добавляют 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива, перемешивают, переворачивая пробирку. Через 30 мин измеряют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 590—700 нм (красный светофильтр) против холостой пробы.
Холостая проба. Ставят так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл дистиллированной воды.
