Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Холостую пробу ставят так же, как опытную, но вместо надосадочной жидкости берут 0,5 мл дистиллированной воды. Одновременно определяют содержание мочевины в стандартной пробе. Стандартную пробу обрабатывают аналогично опытной, но вместо сыворотки берут 0,2 мл стандартного раствора мочевины.
Расчет проводят по формуле
X= -25,
где X — концентрация мочевины в сыворотке крови, мг%; E0n — экстинкция опытной пробы; Е„ — экстинкция стандартной пробы; 25 — концентрация мочевины в калибровочном растворе, мг%.
Для перевода мг% в ммоль/л полученную величину умножают на коэффициент 0,1665. Ошибка метода составляет ±4 %. Источник: 43.
Клиническое значение. Мочевина — основной конечный продукт азотистого обмена. Синтезируется главным образом в печени, а у жвачных животных, кроме того, в стенке рубца из азота аммиака, аминокислот и амидов. Непосредственный предшественник мочевины в печени — гуанидиновая группировка аминокислоты аргинина. На долю мочевины приходится не менее половины остаточного азота крови и 80—83 % мочи.
101
Мочевина главным образом выделяется почками, у жвачных животных часть ее поступает в преджелудки со слюной, где распадается до аммиака и углекислого газа с последующим использованием продуктов распада рубцовой микрофлорой. Концентрация мочевины в крови у здоровых животных колеблется от 20 до 40 мг% (3,33—6,66 ммоль/л).
Значительное повышение содержания мочевины в крови (уремия) наблюдается при циркуляторной недостаточности почек, при которой нарушается фильтрация в клубочках. Такая патология возникает при сердечной недостаточности и дегидратации. Наиболее частые причины уремии — заболевания, при которых поражаются преимущественно почечные клубочки (хронический нефрит), или задержка выделения мочи при мочекаменной болезни, аденоме предстаты и др. Уремией сопровождается почечная недостаточность.
Повышение содержания мочевины в крови наблюдали при алкалозе рубца, скармливании животным большого количества гороха, зеленых бобовых кормов (вико-овсяная смесь, горохо-овсяная смесь). Резкую уремию (до 200 мг%) наблюдают у тяжело больных диспепсией телят (И. П. Кондрахин).
Продукционная гиперазотемия возникает при механических повреждениях тканей, обширных ожогах, лихорадочных состояниях, когда идет усиленный распад тканевых белков.
Тяжесть уремии связана не с концентрацией самой мочевины (она малотоксична), а с накоплением токсических производных гуанидина — гуанидинянтарной кислоты, метилгуанидина, гауни-динуксусной и гуанидинпропионовой кислот, которые образуются в организме вследствие нарушения нормального синтеза мочевины из арганина.
Уменьшение содержания мочевины в крови бывает при длительном белковом недокорме, при нарушении мочевинообразова-тельной функции печени, наблюдаемой при кетозе коров.
Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой. Под свободным аминным азотом (аминазот) понимают азот свободных аминокислот сыворотки (плазмы крови). Общий аминный азот крови включает кроме азота свободных аминокислот азот сложных полипептидов и белков. Из существующих методов определения свободного аминазота крови наиболее распространены нингидрино-вые, один из которых приведен ниже.
Принцип. Аминокислоты при взаимодействии с нингидри-ном подвергаются окислительному дезаминированию и декарбок-силированию. Нингидрин, восстанавливаясь, вступает в реакцию с продуктами этой реакции — образуется соединение, окрашенное в фиолетовый цвет. Интенсивность окрашивания при определенных условиях пропорциональна количеству свободных аминокислот.
102
Реактивы: 0,04 моль/л раствор уксусной кислоты — 0,23 мл ледяной уксусной кислоты (СН3СООН) на 100 мл воды; 1 %-ный раствор нингидрина.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; водяная баня; пробирки с меткой на 10 мл.
Ход определения. Исследование проводят поэтапно.
1. Осаждение белков. В центрифужную пробирку вносят 0,5 мл сыворотки крови, 0,5 мл 0,04 моль/л раствора ледяной уксусной кислоты, закрывают пробкой и помещают в холодную водяную баню, которую доводят до кипения. Пробы прогревают в водяной бане в течение 5 мин (с момента закипания). Затем пробирки охлаждают и содержимое их фильтруют.
2. Фильтрование. К содержимому пробирки добавляют 1 мл дистиллированной воды, перемешивают тонкой стеклянной палочкой и фильтруют через гладкий бумажный фильтр. Пробирку и осадок на фильтре промывают еще 2 раза по 1 мл водой, после чего основной фильтрат и промывные воды объединяют в одну пробирку с меткой на 10 мл.
3. Цветная реакция с нингидрином. К полученному фильтрату добавляют 0,5 мл 1%-ного водного раствора нингидрина, содержимое пробирки перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 20 мин. Затем пробирку охлаждают в водопроводной воде, оставляют стоять 5 мин при комнатной температуре и доводят объем дистиллированной водой до 10 мл (по метке на пробирке). Одновременно ставят контроль на реактивы. К 3 мл дистиллированной воды добавляют 0,5 мл 0,04 моль/л раствора ледяной уксусной кислоты, 0,5 мл 1%-ного водного раствора нингидрина, перемешивают, прогревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, охлаждают под струей водопроводной воды и доводят дистиллированной водой до 10 мл. В качестве контроля можно пользоваться обычной дистиллированной водой.
