Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
27,79
28,86
29,93
30
31,00
32,07
33,14
24,21
35,28
26,35
37,42
38,49
39,56
40,63
40
41,70
42,77
43,83
44,91
45,98
47,05
48,12
49,19
50,26
51,32
Примечание. Сыворотка крови не должна иметь следов гемолиза. Пробирки с сывороткой закрывают резиновыми пробками. Метод преимущественно используют для определения иммунных белков в крови новорожденных животных.
Источники: 9, 29.
Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет-рическим (нефелометрическим) методом. Принцип. Различные белковые фракции сыворотки крови способны осаждаться фосфатными растворами определенной концентрации. При этом образуется очень мелкая взвесь и раствор мутнеет. По степени мутности растворов, устанавливаемой с помощью фотоэлектроколо-риметра, судят о концентрации белков в исследуемой пробе.
Реактивы: основной фосфатный раствор. 33,5 г натрия гидроксида (ч. д. а., х. ч.) растворяют в 400 мл дистиллированной воды, добавляют 226,8 г калия фосфата однозамещенного (КН2РО4, ч. д. а., х. ч.). После растворения охлаждают до комнатной температуры и добавляют дистиллированную воду до объема 500 мл;
рабочие фосфатные растворы. В мерные колбы на 100 мл берут 92,4 мл (№ 1), 74,9 мл (№ 2), 58,8 мл (№ 3), 48,7 мл (№ 4) основного фосфатного раствора и доводят объем дистиллированной водой до метки. Тщательно размешивают путем встряхивания. При хранении разведенных растворов для предупреждения бактериального загрязнения добавляют по 1 капле хлороформа на 100 мл раствора.
7 — 4196
97
Оборудование: фотоколориметр; химические пробирки; пипетки на 1, 2, 5, 10 мл, бюретка; мерные колбы на 100 и 500 мл.
Ход определения. На каждую пробу сыворотки крови в штатив устанавливают по 6 пробирок, обозначив их № 0, 1, 2, 3, 4 и 5. В пробирку № 0 вносят 10 мл дистиллированной воды, в пробирки № 1, 2, 3 и 4 — по 5 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов (№ 1—4). В пробирку № 5 вносят 0,5 л сыворотки крови, 0,75 мл дистиллированной воды и 3,75 мл основного фосфатного раствора, закрывают пробкой и перемешивают путем перевертывания ее 5—6 раз. После этого переносят по 0,5 мл смеси в пробирки № 1, 2, 3, 4 и 1 мл в пробирку № 0. Содержимое пробирок тщательно, но осторожно перемешивают, избегая образования пузырьков воздуха. Через 15 мин определяют на ФЭКе оптическую плотность (E) растворов при красном светофильтре в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля (проба № 0). Проводят измерение в обратной последовательности — сначала в пробирке № 4, а затем в пробирках № 3, 2 и 1.
Расчет ведут по схеме: E пробирки № I — E пробирки № 2= = E альбуминов; E пробирки № 2 — E пробирки № 3 = E а-глобу-линов; Eпробирки № 3 — Eпробирки N»4 = ??-глобулинов; E пробирки № 4 = E у-глобулинов.
Принимая сумму E альбуминов и E всех глобулиновых фракций за 100 %, вычисляют содержание каждой фракции в относительных процентах. Зная концентрацию общего белка сыворотки крови, можно произвести пересчет в абсолютные величины.
Пример расчета: E пробирки № 1 = 0,800; E пробирки № 2 = = 0,400; ? пробирки № 3 = 0,300; ? пробирки № 4 = 0,200. Тогда І? альбуминов составит 0,800 — 0,400 = 0,400; E у-глобулинов 0,400 -- 0,300 = 0,100; E ?-глобулинов 0,300 - 0,200 = 0,100; ?у-глобули-нов = 0,200.
Относительный процент альбуминов = ' ' ^ = 50 %;
0,о00
а- и ?-глобулинов = 0^n-100 = по 12,5 %;
0,800
Y-глобулинов = 0^2.0"..100 = 25,0 %.
U,oUU
Для облегчения расчета нулевые знаки в показаниях экстинк-ции не учитывают. Ошибка метода составляет + 4 %. Источники: 32, 52.
Клиническое значение. Альбумин — простой низкомолекулярный белок (40—70 тыс. дальтон), синтезируется в печени. Основные его функции — связывание воды, обеспечение коллоидно-осмотического (онкотического) давления, транспорт ионов магния, кальция, билирубина, СЖК, стероидных гормонов и других веществ эндогенного и экзогенного происхождения.
Снижение содержания альбумина наблюдается при уменьшении его синтеза, обусловленного поражением печени (гепатит, гепатоз,
98
цирроз, амилоидоз печени), острой и хронической пневмонией, бронхопневмонией, лейкозом и др.; при недостатке протеина в кормах, плохом его усвоении, больших потерях с мочой (алиментарная дистрофия, гипокобальтоз, диарея до наступления обезвоживания).
Увеличение содержания альбуминов встречается очень редко и чаще связано с дегидратацией организма.
Из оц-глобулинов в сыворотке крови обнаруживают два белка: -антитрипсин и аргликопротеин. а\-Антитрипсин — ингибитор ряда протеаз. Его содержание повышается при механическом повреждении тканей и воспалительных заболеваниях. сц-Гликопроте-ин участвует в транспорте прогестерона и тестостерона. Содержание его возрастает при воспалительных процессах, снижается при циррозе печени.
а2-Глобулины содержат а2-макроглобулин, гаптоглобин и церу-лоплазмин. а2-Макроглобулин — цинксодержащий гликопротеин с большой молекулярной массой. Ингибирует протеолитические ферменты трипсин, химотрипсин, тромбин, плазмин и калликре-ин. Содержание его увеличивается при циррозе печени, нефрозе, сахарном диабете, снижается при ревматоидном полиартрите.