Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 46

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 40 41 42 43 44 45 < 46 > 47 48 49 50 51 52 .. 246 >> Следующая

27,79
28,86
29,93

30
31,00
32,07
33,14
24,21
35,28
26,35
37,42
38,49
39,56
40,63

40
41,70
42,77
43,83
44,91
45,98
47,05
48,12
49,19
50,26
51,32

Примечание. Сыворотка крови не должна иметь следов гемолиза. Пробирки с сывороткой закрывают резиновыми пробками. Метод преимущественно используют для определения иммунных белков в крови новорожденных животных.

Источники: 9, 29.

Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет-рическим (нефелометрическим) методом. Принцип. Различные белковые фракции сыворотки крови способны осаждаться фосфатными растворами определенной концентрации. При этом образуется очень мелкая взвесь и раствор мутнеет. По степени мутности растворов, устанавливаемой с помощью фотоэлектроколо-риметра, судят о концентрации белков в исследуемой пробе.

Реактивы: основной фосфатный раствор. 33,5 г натрия гидроксида (ч. д. а., х. ч.) растворяют в 400 мл дистиллированной воды, добавляют 226,8 г калия фосфата однозамещенного (КН2РО4, ч. д. а., х. ч.). После растворения охлаждают до комнатной температуры и добавляют дистиллированную воду до объема 500 мл;

рабочие фосфатные растворы. В мерные колбы на 100 мл берут 92,4 мл (№ 1), 74,9 мл (№ 2), 58,8 мл (№ 3), 48,7 мл (№ 4) основного фосфатного раствора и доводят объем дистиллированной водой до метки. Тщательно размешивают путем встряхивания. При хранении разведенных растворов для предупреждения бактериального загрязнения добавляют по 1 капле хлороформа на 100 мл раствора.

7 — 4196

97

Оборудование: фотоколориметр; химические пробирки; пипетки на 1, 2, 5, 10 мл, бюретка; мерные колбы на 100 и 500 мл.

Ход определения. На каждую пробу сыворотки крови в штатив устанавливают по 6 пробирок, обозначив их № 0, 1, 2, 3, 4 и 5. В пробирку № 0 вносят 10 мл дистиллированной воды, в пробирки № 1, 2, 3 и 4 — по 5 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов (№ 1—4). В пробирку № 5 вносят 0,5 л сыворотки крови, 0,75 мл дистиллированной воды и 3,75 мл основного фосфатного раствора, закрывают пробкой и перемешивают путем перевертывания ее 5—6 раз. После этого переносят по 0,5 мл смеси в пробирки № 1, 2, 3, 4 и 1 мл в пробирку № 0. Содержимое пробирок тщательно, но осторожно перемешивают, избегая образования пузырьков воздуха. Через 15 мин определяют на ФЭКе оптическую плотность (E) растворов при красном светофильтре в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля (проба № 0). Проводят измерение в обратной последовательности — сначала в пробирке № 4, а затем в пробирках № 3, 2 и 1.

Расчет ведут по схеме: E пробирки № I — E пробирки № 2= = E альбуминов; E пробирки № 2 — E пробирки № 3 = E а-глобу-линов; Eпробирки № 3 — Eпробирки N»4 = ??-глобулинов; E пробирки № 4 = E у-глобулинов.

Принимая сумму E альбуминов и E всех глобулиновых фракций за 100 %, вычисляют содержание каждой фракции в относительных процентах. Зная концентрацию общего белка сыворотки крови, можно произвести пересчет в абсолютные величины.

Пример расчета: E пробирки № 1 = 0,800; E пробирки № 2 = = 0,400; ? пробирки № 3 = 0,300; ? пробирки № 4 = 0,200. Тогда І? альбуминов составит 0,800 — 0,400 = 0,400; E у-глобулинов 0,400 -- 0,300 = 0,100; E ?-глобулинов 0,300 - 0,200 = 0,100; ?у-глобули-нов = 0,200.

Относительный процент альбуминов = ' ' ^ = 50 %;

0,о00

а- и ?-глобулинов = 0^n-100 = по 12,5 %;

0,800

Y-глобулинов = 0^2.0"..100 = 25,0 %.

U,oUU

Для облегчения расчета нулевые знаки в показаниях экстинк-ции не учитывают. Ошибка метода составляет + 4 %. Источники: 32, 52.

Клиническое значение. Альбумин — простой низкомолекулярный белок (40—70 тыс. дальтон), синтезируется в печени. Основные его функции — связывание воды, обеспечение коллоидно-осмотического (онкотического) давления, транспорт ионов магния, кальция, билирубина, СЖК, стероидных гормонов и других веществ эндогенного и экзогенного происхождения.

Снижение содержания альбумина наблюдается при уменьшении его синтеза, обусловленного поражением печени (гепатит, гепатоз,

98

цирроз, амилоидоз печени), острой и хронической пневмонией, бронхопневмонией, лейкозом и др.; при недостатке протеина в кормах, плохом его усвоении, больших потерях с мочой (алиментарная дистрофия, гипокобальтоз, диарея до наступления обезвоживания).

Увеличение содержания альбуминов встречается очень редко и чаще связано с дегидратацией организма.

Из оц-глобулинов в сыворотке крови обнаруживают два белка: -антитрипсин и аргликопротеин. а\-Антитрипсин — ингибитор ряда протеаз. Его содержание повышается при механическом повреждении тканей и воспалительных заболеваниях. сц-Гликопроте-ин участвует в транспорте прогестерона и тестостерона. Содержание его возрастает при воспалительных процессах, снижается при циррозе печени.

а2-Глобулины содержат а2-макроглобулин, гаптоглобин и церу-лоплазмин. а2-Макроглобулин — цинксодержащий гликопротеин с большой молекулярной массой. Ингибирует протеолитические ферменты трипсин, химотрипсин, тромбин, плазмин и калликре-ин. Содержание его увеличивается при циррозе печени, нефрозе, сахарном диабете, снижается при ревматоидном полиартрите.
Предыдущая << 1 .. 40 41 42 43 44 45 < 46 > 47 48 49 50 51 52 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed