Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 44

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 38 39 40 41 42 43 < 44 > 45 46 47 48 49 50 .. 246 >> Следующая


рабочий раствор БКЗ в ацетатном буфере. В мерную колбу вместимостью 1 л вносят 85 мл 1,2 ммоль/л раствора БКЗ, доводят объем до метки ацетатным буфером с детергентом. Стабилен при хранении в холодильнике в посуде из темного стекла;

основной калибровочный раствор альбумина, 10 г на 100 мл. Можно использовать ампулированный 10%-ный раствор альбумина плацентарного.

Оборудование: фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр.

94

Ход определения. 10 мкл сыворотки крови (или 0,1 мл сыворотки, разведенной в 10 раз 0,9%-ным раствором NaCl) тщательно перемешивают, избегая образования пены, с 4 мл рабочего раствора БКЗ в ацетатном буфере. Через 5—10 мин измеряют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 630—690 нм (красный светофильтр) против холостой пробы на реактивы или на спектрофотометре при длине волны 625 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Окраска стабильна в течение 8 ч.

Холостую пробу ставят так же, как опытную, но вместо сыворотки добавляют 0,1 мл воды.

Расчет ведут по калибровочной кривой. Построение калибровочной кривой: готовят ряд разведений основного калибровочного раствора, как указано в таблице 12. Калибровочные растворы обрабатывают так же, как и опытные, но вместо сыворотки добавляют 10 мкл калибровочного раствора. Калибровочная кривая линейна до концентрации альбумина 60 г/л.

12. Приготовление разведений основного калибровочного раствора


пробирки
Основной калибровочный раствор альбумина, мл
Дистиллированная вода, мл
Содержание альбумина в сыворотке, г/л

1
1,0
4,0
20

2
1,5
3,5
30

4
2,0
3,0
40

5
2,5
2,5
50

6
3,0
2,0
60

Источники: 43, 45.

Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови по реакции с натрия сульфитом. Принцип. При взаимодействии иммунных глобулинов сыворотки крови с раствором натрия сульфита изменяется структура белковых молекул и раствор мутнеет с интенсивностью, пропорциональной концентрации иммуноглобулинов.

Реактив: 18%-ный раствор натрия сульфита (Na2SO3, ч. д. а., х. ч.). 18 г вещества растворяют в 82 мл дистиллированной прокипяченной воды.

Оборудование: фотоэлектроколориметр.

Ход определения. В две пробирки вносят по 3,8 мл 18%-ного раствора натрия сульфита и добавляют по 0,1 мл сыворотки крови, смешивают и через 20 мин колориметрируют на ФЭК-56М при синем светофильтре (540 нм) или на КФК-2, КФК-3 при длине волны 400 + 5 нм в кювете с толщиной слоя 5 мм против 18%-ного раствора натрия сульфита.

Если оптическая плотность (экстинкция) подготовленного образца сыворотки крови выше 1,3—1,5, сыворотку разводят изотоническим раствором натрия хлорида 1 : 1 и повторяют измерение. Полученные результаты параллельных определений складывают и усредняют.

Расчет ведут по калибровочной кривой, построенной с использованием сыворотки крови с известным содержанием иммуно-

95

13. Содержание иммуноглобулинов (IG) в сыворотке крови в зависимости от оптической плотности

Оптическая плотность

Содержание IG, мг/мл

Оптическая плотность

Содержание IG, мг/мл

0,1

0,11

0,12

0,125

0,13

0,135

0,14

0,145

0,15

0,155

0,16

0,165

0,17

0,175

0,18

0,185

0,19

0,195

0,20

0,25

0,30

0,35

0,40

2,28 2,60 2,92 3,03 3,14 3,37 3,60 3,70 3,80 3,93 4,06 4,17 4,28 4,39 4,50 4,61 4,72 4,83 4,94 5,80 6,80 8,00 9,00

0,45

0,50

0,55

0,60

0,65

0,70

0,75

0,80

0,85

0,90

0,95

1,00

1,05

1,1

1,15

1,2

1,25

1,30

1,35

1,40

1,45

1,50

10,00

11,4

12,4

13,6

14,6

15,8

16,8

17,8

19,0

20,2

21,2

22,3

23,4

24,6

25,8

26,8

28,0

29,0

30,1

31,2

32,3

33,4

глобулинов. Для этой цели можно пользоваться таблицей Н. А. Кос-тыны (табл. 13).

Примечание. Метод приемлем в основном для определения иммунных глобулинов у новорожденных животных. Источник: 20.

Определение иммунных белков в сыворотке крови по реакции с цинка сульфатом (цинк-сульфатный тест — ЦСТ). Принцип. При внесении в раствор, содержащий иммунные белки, цинка сульфата изменяется белковая молекула и раствор мутнеет. Степень помутнения раствора прямо пропорциональна содержанию иммуноглобулинов и может быть измерена фотометрическими приборами.

Реактивы: 20,8 мг/100 мл раствор сульфата цинка (х. ч.). Готовят в день исследований на прокипяченной дистиллированной воде (для удаления углекислого газа). Длительному хранению не подлежит;

барий сульфатный — стандарт мутности: 3 мл 1,15%-ного раствора бария хлорида (х. ч.) на дистиллированной воде вносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки 0,2%-ным раствором серной кислоты. Полученный раствор соответствует 20 ед. ЦСТ по степени мутности. Для приготовления стандарта 40 ед. мутности в мерную колбу на 100 мл вносят 6 мл 1,15%-ного раствора бария хлорида, а для стандарта с 10 ед. мутности — 1,5 мл. Далее растворяют, как в предыдущем случае. По полученным трем стандартным растворам мутности (10,20, 40 ед.) строят калибровочную кривую для данного прибора (ФЭК).
Предыдущая << 1 .. 38 39 40 41 42 43 < 44 > 45 46 47 48 49 50 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed