Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Расчет ведут по калибровочному графику. При построении калибровочного графика готовят рабочие калибровочные растворы из основного стандартного раствора 10%-ного белка (табл. 11).
11. Приготовление рабочих калибровочных растворов белка
Nq пробирки
Основной стандартный раствор альбумина, мл
0,9%-ный раствор натрия хлорида, мл
Концентрация белка, г/л
1
0,2
0,8
20
2
0,4
0,6
40
3
0,6
0,4
60
4
0,8
0,2
80
5
1,0
—
100
92
Из каждого из четырех разведений альбумина и одной неразве-денной пробы берут по 0,1 мл и прибавляют по 5 мл рабочего би-уретового реактива. Через 30 мин измеряют экстинкцию на ФЭКе, как в опыте против холостой пробы.
Измерения оптической плотности стандартных растворов начинают с растворов наименьшей концентрации. По полученным данным из пяти определений строят калибровочную кривую, которую периодически проверяют.
Примечания: 1. При содержании белка в сыворотке крови больше 10 % сыворотку разводят физиологическим раствором 1:1, результат умножают на 2. 2. Рефрактометрический и биуретовый методы по точности сравнимы между собой. Биуретовый метод хорошо воспроизводимый, однако необходимо использовать реактивы ч. д. а. или х. ч. Строго соблюдать правила их приготовления и хранения, предъявлять строгие требования к наборам реактивов заводского изготовления, использовать кипяченую дистиллированную воду. Источники: 43, 67.
Клиническое значение. Белки крови выполняют многие функции: поддерживают постоянство онкотического давления, pH крови, уровень катионов крови, играют важную роль в образовании иммунитета, комплексов с углеводами, липидами, гормонами и другими веществами.
Альбумины и фибриноген крови образуются в печеночных клетках, глобулины — в клетках ретикуло-эндотелиальной системы костного мозга и ретикулоэндотелиальных (купферовых или звездчатых) клетках печени. Поэтому содержание сывороточных белков во многом зависит от состояния печени. При болезнях печени снижается синтез альбуминов и фибриногена, увеличивается образование глобулинов (за исключением цирроза), наступает дис-протеинемия, нарушаются процессы обновления белков.
Нормативы содержания общего белка сыворотки крови приведены в приложениях 5—7.
Снижение количества общего белка в сыворотке крови (гипопро-теинемия) отмечается при длительном недокорме животных, алиментарной остеодистрофии, уровской болезни, гипокобальтозе, эндемическом зобе, хронических расстройствах желудочно-кишечного тракта, нефрите, нефрозе, циррозе печени, туберкулезе и других заболеваниях, при которых снижаются аппетит и усвоение питательных веществ корма.
Повышение уровня общего белка в сыворотке крови (гиперпротеи-немия) в условиях интенсивного животноводства встречается значительно чаще, чем гипопротеинемия. Оно бывает при белковом перекорме, кетозе, вторичной остеодистрофии, токсикозах и других болезнях, сопровождающихся дистрофией или воспалением
93
печени. Повышение содержания общего белка в сыворотке крови в этих случаях идет за счет глобулиновых фракций при одновременном уменьшении концентрации альбуминов.
Гиперпротеинемия бывает при тяжелых формах диареи, дегидратации организма, острых воспалительных процессах, флегмоне, сепсисе, пневмонии, бронхопневмонии и др.
Примечание. Концентрация общего белка в плазме крови на 3—5 г/л больше, чем в сыворотке, вследствие присутствия в ней фибриногена. После кормления содержание белка повышается.
Определение белковых фракций в сыворотке крови. Для определения белковых фракций в сыворотке крови используют методы фотометрии, высаливания нейтральными солями, электрофоретического фракционирования, иммунологические и др.
Из электрофоретических методов предпочтение отдается электрофорезу на пленках из ацетата целлюлозы и электрофорезу на бумаге. Однако для выполнения этих методов требуются дефицитные реактивы и специальные приспособления и приборы, поэтому широкого применения в ветеринарии они не находят. Наиболее простые методы приведены ниже.
Определение альбумина в сыворотке крови по реакции с бром-крезоловым зеленым. Принцип. При взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым в слабокислой среде в присутствии детергента образуется окрашенный комплекс синего цвета.
Реактивы: уксусная кислота, 1 моль/л. В мерную колбу вместимостью 1 л вносят 60 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем до метки;
натрия гидроксид (ч. д. а., х. ч.), 1 моль/л;
полиоксиэтиленлауриловый эфир (бридж 35);
ацетатный буфер, 0,05 моль/л, pH 4,2 с добавлением детергента. 0,85 г бриджа 35 растворяют в 200 мл воды, добавляют 50 мл 1 моль/л раствора уксусной кислоты, 13,2 мл 1 моль/л раствора натрия гидроксида и доводят объем водой до 1 л. Перемешивают, проверяют pH. Реактив стабилен при хранении в холодильнике;
бромкреозоловый зеленый (БКЗ) водорастворимый индикатор (ч. д. а.). 1,2 ммоль/л. 0,4292 БКЗ растворяют в 200 мл воды в мерной колбе вместимостью 500 мл и доводят объем до метки. Стабилен при хранении в холодильнике в посуде из темного стекла;
