Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
В клинической практике диагностическое значение имеет неорганический фосфор. Нормативы содержания его в сыворотке (плазме) крови здоровых животных приведены в приложениях 5 и 6.
Снижение уровня фосфора в крови отмечается при длительном недостатке его в рационе, плохом усвоении, при расстройствах желудочно-кишечного тракта или дефиците витамина D, при гиперфункции паращитовидных желез и гипофункции щитовидной железы, когда увеличивается секреция паратгормона и уменьшается выработка кальцитонина. Отмечается оно и при алиментарной осте-одистрофии, рахите, уровской болезни, пеллагре, длительном лечении инсулином, кальция хлоридом, болезнях желудочно-кишечного тракта.
Повышение уровня фосфора в крови может быть вызвано уменьшением секреции паратгормона, когда тормозится реабсорбция фосфора в почках. Увеличение кальцитонина стимулирует реаб-сорбцию фосфора в почках и приводит к гиперфосфатемии.
Гиперфосфатемия встречается при сердечной недостаточности, кетозе, приеме больших доз витамина D, нефрите, нефрозе, токсикозах беременности, мышечном перенапряжении. У телят молочного периода содержание фосфора в крови несколько выше, чем у взрослых животных. Содержание фосфора в безбелковом фильтрате цельной крови, плазмы и сыворотки, обработанных одновременно, одинаково.
Определение неорганического фосфора в сыворотке кровн животных с аскорбиновой кислотой. Принцип. В безбелковом
84
центрифугате неорганический фосфор реагирует с молибденовой кислотой с образованием фосфорно-молибденовой кислоты, которая восстанавливается аскорбиновой кислотой до синего фосфор-но-молибденового комплекса. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации неорганического фосфора.
Реактивы: хлорная кислота — 20 мл;
50%-ный раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ) — 100 мл (флакон № 1);
5%-ный раствор молибдената аммония — 100 мл (флакон № 2); аскорбиновая кислота — 1 г (флакон № 3); основной стандартный раствор фосфора — 100 мг% (ампула); 1 н. соляная кислота — 10 мл.
Подготовка рабочих растворов. 10%-ныйраствор ТХУ: содержимое флакона № 1 переносят в колбу на 500 мл и доводят объем дистиллированной водой до метки. Можно приготовить 100 мл: 20 мл 50%-ного раствора ТХУ в колбе на 100 мл довести дистиллированной водой до метки. В случае появления мутности раствор фильтруется.
5%-ный раствор молибдената аммония (флакон № 2) готов к применению.
0,1 н. раствор соляной кислоты: содержимое флакона (10 мл) 1 н. соляной кислоты переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят дистиллированной водой до метки.
Раствор аскорбиновой кислоты: содержимое флакона № 3 растворяют в 100 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты. Раствор готовят перед использованием.
Рабочий калибровочный (стандартный) раствор фосфора: в мерную колбу на 100 мл вносят 5 мл (ампула) основного калибровочного раствора фосфора и доводят объем дистиллированной водой до метки. Получают 5 мг%-ный (50 мг/л) раствор фосфора.
Ход определения. Опытная проба. В центрифужную пробирку вносят 2,5 мл дистиллированной воды, 0,5 мл сыворотки крови и 3 мл 10%-ного раствора ТХУ. Перемешивают стеклянной палочкой. Через 10 мин центрифугируют 20 мин при 3000 мин Осторожно с помощью шприца отбирают 3 мл центрифугата, добавляют 0,6 мл раствора молибдената аммония, 0,12 мл раствора аскорбиновой кислоты и 1,3 мл дистиллированной воды. Перемешивают и через 20 мин колориметрируют в кювете с толщиной слоя 1 см при красном светофильтре (630—690 нм) против контроля.
Контроль. К 3 мл 10%-ного раствора ТХУ добавляют 0,6 мл раствора молибдената аммония, 0,12 мл раствора аскорбиновой кислоты, 1,3 мл дистиллированной воды.
Калибровочный раствор. Перемешивают 2,5 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 5 мг%-ного раствора фосфора, 3 мл 10%-ного раствора ТХУ. Через 30 мин 3 мл этой смеси переносят в другую пробирку, добавляют 0,6 мл раствора молибдената аммония, 0,12 мл раствора ас-
85
корбиновой кислоты, 1,3 мл дистиллированной воды. Через 20 мин колориметрируют при тех же условиях, что и опытную пробу. Расчет ведут по формуле
где X — количество неорганического фосфора, мг/100 мл; E0n — экстинкция опытной пробы; Ест — экстинкция 5 мг/100 мл раствора фосфора; 5 — коэффициент для перевода в мг/100 мл (мг%).
При переводе мг% в ммоль полученную величину умножают на 0,323.
Источник: 27.
Определение магния в сыворотке (плазме) крови по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И. В. Петрухина). Принцип. Магний реагирует с титановым желтым в щелочной среде с образованием окрашенных соединений. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации магния.
P е а к т и в ы: 20 %-ный раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ);
0,01%-ный раствор титанового желтого. Готовят в день определения;
0,02%-ный раствор поливинилового спирта;
основной стандартный раствор магния. Растворяют 8,458 г магния хлорида (MgCl2 • 6 H2O) в дистиллированной воде и доводят до 1 л в мерной колбе: 1 мл раствора содержит 1 мг магния (100 мг%). Можно готовить 0,01 н. раствор магния сульфата из стандарт-титра (фиксанала), который содержит 12,15% магния;