Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
77
6,8 г соли растворяют дистиллированной водой в стаканчике, затем переносят в мерную колбу на 500 мл и доводят объем до метки дистиллированной водой;
стандартный 2,5 ммоль/л раствор кальция: 25 мг кальция углекислого безводного (ч. д. а.) в мерной колбе на 100 мл растворяют 5 мл 0,1 н. соляной кислоты (готовят из фиксанала) и доводят объем до метки дистиллированной водой;
рабочий реактив Арсеназо III; 0,3 ммоль/л Арсеназо HI в 0,1 моль/л ацетатном буфере с pH 4,75. Для приготовления 250 мл рабочего реактива 62 мг Арсеназо III растворяют в 250 мл ацетатного буфера, к полученному раствору добавляют 250 мг натрия до-децилсульфата (до 0,1 %).
Оборудование: фотоэлектроколориметр; пробирки полистироловые; пипетки вместимостью 0,1 и 5 мл.
Ход определения. К5мл рабочего реактива Арсеназо III добавляют 50 мкл сыворотки (соотношение 1 : 100), смешивают, избегая образования пены. Через 2 мин и позже измеряют оптическую плотность образцов сыворотки крови против рабочего реактива Арсеназо III в кювете с толщиной слоя жидкости 10 мм при длине волны 590 нм. Параллельно готовят стандартную пробу аналогично опытной, но вместо сыворотки добавляют 50 мкл стандартного раствора кальция с содержанием 2,5 ммоль/л.
Концентрацию кальция (Ca, ммоль/л) в сыворотке крови рассчитывают по формуле
Ca= §= -2,5,
где E0n — экстинкция опытной пробы; E1^ — экстинкция стандартной пробы; 2,5 — коэффициент для пересчета в ммоль/л.
Примечания. 1. Исследуемая сыворотка не должна содержать следов гемолиза, алиментарной гиперлипидемии. 2. Исследование сыворотки крови проводят в течение первых суток после получения при хранении при температуре не более 4 °С. 3. Посуда для определения кальция должна быть химически чистой. Желательно использовать не стеклянную, а полистироловую посуду. Источник: метод изложен в описании А. И. Овсянникова, С. А. Конькова, В. К. Гуркало. Измерение содержания кальция в сыворотке крови и других биологических жидкостях комплексоном Арсеназо III [( Клиническая лабораторная диагностика. — Киев, 1999, № 1. — С. 16—18 с изменениями, внесенными М. Л. Лизогу-бом, Н. Н. Куевдой (Крымский АТУ)]. В описанную методику внесены следующие изменения: концентрация Арсеназо III увеличена до 0,3 ммоль/л вместо 0,15 ммоль/л; в качестве детергента использован натрия додецилсульфат, концентрация которого 0,1 % вместо 0,04 %; определение кальция проводилось в сыворотке крови животных.
78
Определение общего кальция в сыворотке крови с индикатором мурексидом. Принцип. Мурексид в щелочной среде образует с кальцием непрочное соединение розового цвета. При добавлении к раствору трилона Б образуется стойкое комплексное соединение, розовый цвет переходит в фиолетовый.
Реактивы: 0,005 н. раствор трилона Б (готовят из стандарт-титра или из 0,1 н. раствора трилона Б): 10 мл 0,1 н. раствора трилона Б в мерной колбе доводят дистиллированной водой до 200 мл. Устойчив 2 мес;
2 н. раствор натрия гидроксида. 80 г NaOH (ч. д. а., х. ч.) растворяют в 1 л дистиллированной воды;
мурексид (ч. д. а., х. ч.) свежеприготовленный раствор индикатора: 10 мг на 20 мл воды;
кальция карбонат безводный (ч. д. а., х. ч.). Стандартный 2,5 моль/л (10 мг%) раствор: 25 мг вещества растворяют в мерной колбе на 100 мл. Пригоден для исследования кальция в крови животных, кроме яйценосной птицы. При исследовании крови кур и другой яйценосной птицы необходимо подготовить 3,8 ммоль/л (15,2 мг%) раствор: 38 мг вещества растворить в мерной колбе на 100 мл.
Оборудование: стаканчики вместимостью 50 мл (лучше полистироловые); микробюретка на 2 мл с оттянутым концом; пипетки.
Ход определения. Стандартная проба: в стаканчик вносят 10 мл дистиллированной воды, 0,2 мл 2 н. раствора щелочи, 0,5 мл раствора кальция карбоната с содержанием 10 мг% кальция и 3 капли свежеприготовленного раствора мурексида. Раствор окрашивается в слабо-розовый цвет. Осторожно титруют раствором трилона Б до появления слабо-фиолетового цвета. Записывают результат.
Проба с сывороткой крови: в стаканчик вносят 10 мл воды, 0,2 мл раствора щелочи, 0,5 мл сыворотки крови и 3 капли раствора мурексида. Появляется слабо-розовое окрашивание. Затем титруют раствором трилона Б до появления слабо-фиолетового цвета, идентичного стандартной пробе.
Расчет ведут по формуле
где X — количество кальция, ммоль/л; А — количество раствора трилона Б, пошедшего на титрование образца сыворотки крови, мл; Б — количество раствора, пошедшего на титрования стандарта, мл; 2,5 — коэффициент для перевода в ммоль/л.
Если исчисление кальция идет в мг%, то за коэффициент берут величину 10. При исследовании сыворотки кур-несушек, когда в качестве стандарта взят раствор 3,8 ммоль/л (15,2 мг%), коэффициентами будут величины 3,8 или 15,2.
79
(Описанная методика апробирована на кафедре терапии и клинической диагностики Крымского государственного агротехноло-гического университета.)
Определение кальция в костной ткани. Предварительно проводят озоление кости. Кость освобождают от мышц, сухожилий, связок и взвешивают. У трубчатых костей отпиливают суставные концы (эпифизы). Каждый из трех частей (два эпифиза и диафиз) распиливают вдоль и поперек на 4 части. Для анализа берут примерно 1/2—1/4 часть массы диафиза и эпифиза. Масса навески зависит от размера кости, но всегда нужно брать одинаковый процент массы каждой части, предназначенной для анализа.
