Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
В настоящее время на российском рынке достаточно фирм, выпускающих анализаторы для определения KOP крови (ЭЦ-60 и др.). В ветеринарии анализаторы KOP используются крайне редко.
Состояние бикарбонатной буферной системы проводят по определению в плазме крови резервной щелочности. Под резервной щелочностью понимают запас бикарбонатов крови, определяемый по общему CO2. Известно, что углекислый газ в основном содержится в составе бикарбонатов крови и только 1/20 его часть находится в растворенном и свободном состоянии. Такая малая доля существенно не влияет на оценку состояния бикарбонатной системы по общему CO2.
3.3.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗЕРВНОЙ ЩЕЛОЧНОСТИ КРОВИ ДИФФУЗНЫМ МЕТОДОМ ПО И. П. КОНДРАХИНУ
Принцип метода. В одной половине колбы плазму крови обрабатывают серной кислотой, в результате чего выделяется углекислый газ, входящий в состав бикарбонатов. Выделившийся углекислый газ поглощается раствором натрия гидроксида, который находится в другой половине колбы. Избыток натрия гидроксида, не вошедший в реакцию с углекислым газом, и половину натрия гидрокарбоната (Na2CO3), образовавшегося в процессе поглощения CO2, оттитровывают раствором серной кислоты. По количеству первоначально связанного натрия гидроксида определяют количество выделенного из плазмы углекислого газа, которое эквивалентно содержанию бикарбонатов.
Реактивы: 0,1 н. (0,05 моль/л) раствор серной кислоты (готовят из фиксанала);
0,02 н. (0,01 моль/л) (точно) раствор серной кислоты (готовят из 0,1 н. раствора серной кислоты); 0,1 н. (0,1 моль/л) раствор натрия гидроксида;
0,02 н. (0,02 моль/л) раствор натрия гидроксида (готовят из 0,1 н. раствора натрия гидроксида). Титр этого раствора проверяют перед анализом и доводят до нужной величины;
5*
67
Размеры пробок
.020.
.020,
Рис. 1. Прибор для определения резервной щелочности крови
5 %-ный раствор серной кислоты;
1 %-ный спиртовой раствор фенолфталеина.
Оборудование: сдвоенные колбы с резиновыми пробками (рис. 1). Они должны быть хорошо вымыты без следов щелочи и кислоты; микробюретки на 2 и 5 мл; центрифужные пробирки.
Ход определения. В чистые сухие центрифужные пробирки вносят 0,5—1,0 мл вазелинового масла, 1—2 капли 1%-ного раствора гепарина. Кровь берут из яремной вены в подготовленную пробирку под слой вазелинового масла, закрывают пробкой, осторожно перемешивают. В лаборатории центрифугируют ее при
3000 мин-1 в течение 15 мин. Плазму крови хранят в бытовом 4 °С. Анализ проводят в течение
холодильнике при температуре 8—12 ч после взятия образца крови.
По количеству проб крови с учетом параллельных исследований подбирают сдвоенные колбы и три сдвоенные колбы оставляют для контроля. Точность результатов всей серии исследований полностью зависит от точности титрования раствора натрия гид-роксида в контрольных колбах. Все колбы закрывают резиновыми пробками.
Анализы проводят серийно. В одну из каждой пары сдвоенных колб, поочередно открывая, вносят с помощью пипетки и шприца или резиновой груши по 2 мл 0,02 н. раствора натрия гидроксида и плотно закрывают пробкой. В смежную колбу, кроме контрольных, опять поочередно открывая и закрывая, вносят 0,5 мл плазмы крови, находящейся под вазелиновым маслом. После этого в колбы с плазмой (контрольные без плазмы), также поочередно открывая, вносят из пипетки (не выдувая) по 1 мл 5%-ного раствора серной кислоты и быстро плотно закрывают пробкой. Проверяют, хорошо ли закрыты колбы, осторожно вращательными движениями перемешивают плазму крови с кислотой и оставляют стоять в течение 4 ч. Перемешивают плазму с кислотой не менее 3 раз.
Через 4 ч приступают к титрованию. Для этого поочередно открывают колбу, где находится раствор натрия гидроксида, вносят туда 1—2 капли раствора фенолфталеина и титруют из микробюретки на 2 мл 0,02 н. раствором серной кислоты до полного обес-
68
цвечивания раствора. Опытные и контрольные пробы титруют с одинаковой скоростью.
Расчет. По разнице результатов титрования в контрольных и опытных образцах определяют количество мл 0,02 н. раствора натрия гидроксида, связанного с углекислым газом, вытесненным из бикарбонатов плазмы.
Расчет ведут по формуле
X = !_?-"; = юо, или (Ук - Vn) • 89,6,
где X — количество CO2, об.%; VK — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контроля, мл; Vn — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование исследуемого образца, мл; Vnn — количество плазмы крови, мл (в методике принято равным 0,5 мл); 0,448 — коэффициент пересчета 0,02 н. раствора натрия гидроксида на CO2 в условиях данной реакции; 100 — коэффициент для пересчета результатов анализа на 100 мл плазмы крови.
В конечном счете разницу количества (мл) 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контрольного и опытного образцов, умножают на коэффициент 89,6 и получают конечный результат в об.% CO2. Ошибка метода составляет +3 %.
Источники: 29, 34.
Нормативы величины резервной щелочности плазмы крови животных представлены в приложениях 5 и 6.