Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 199

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 193 194 195 196 197 198 < 199 > 200 201 202 203 204 205 .. 246 >> Следующая


Метод позволяет определять алкалоиды в количестве 2—50 мг/кг. Относительная ошибка определения около 30 %.

Реактивы: вышеперечисленные алкалоиды и их растворы в хлороформе концентрацией 5 мг/мл;

алюминия оксид для хроматографии II степени активности;

10%-ный раствор 25% (ч. д. а.) аммиака водного;

висмута нитрат основной (ч. д. а.);

динопиловый эфир фталевой кислоты (динопилфталат) для хроматографии (ч. д. а.); калия йодид (х. ч.); кислота винная (ч. д. а.);

5 и 10%-ный растворы кислоты серной (ос. ч.); 25%-ный раствор кислоты уксусной (х. ч.); кислота щавелевая (ч. д. а.);

подвижный растворитель для ТСХ: хлороформ-ацетон-дино-пилфталат (5:4: 1);

424

реактив I. Растворяют 16,5 г висмута нитрата в 500 мл 25%-ной уксусной кислоты, отдельно растворяют 80 г калия йодида в 200 мл дистиллированной воды, оба раствора смешивают (1:1) и выдерживают в склянке из темного стекла 1 мес. Для проявления алкалоидов смешивают 20 мл готового раствора с 20 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл воды, предел обнаружения на бумаге — 3—5 мкг алкалоида;

реактив II. В 800 мл дистиллированной воды растворяют 200 г винной кислоты, затем 17 г висмута нитрата. Отдельно растворяют 160 г калия йодида в 400 мл воды. Оба раствора смешивают и хранят в склянке из темного стекла. Для проявления алкалоидов берут 10 мл основного раствора, вносят 50 мл воды и растворяют 10 г винной кислоты. Чувствительность реакции на бумаге — 1—3 мкг алкалоида.

Оборудование: бумага хроматографическая марки «М»; камера для люминесцентного анализа или УФ-осветитель; мельница электрическая МРГ-1; сито 100 меш.; центрифуга со стаканами вместимостью 100 мл и более и другое оборудование, необходимое для проведения анализа с помощью ТСХ.

Ход определения. Экстракцию проводят двумя способами: извлечение водой в виде солей и в форме оснований органическими растворителями.

При экстракции в виде солей 100 г измельченной пробы кормов заливают водой в соотношении для сочных кормов 1 : 4, для сухих — 1:10. В склянку с материалом при постоянном помешивании добавляют 10%-ный раствор серной кислоты до pH 3. Затем склянку тщательно взбалтывают и ставят в водяную баню при температуре 40 °С на 2 ч при периодическом помешивании. Дальнейшее исследование сочных кормов проводят сразу же после окончания нагревания, сухих объектов — через 24 ч после настаивания.

Водную вытяжку из растений фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку, промывают хлороформом порциями по 30 мл 2 раза путем легкого взбалтывания в течение 5 мин. Хлороформ отделяют и отбрасывают, а к очищенной водной фазе (желательно на холоде) добавляют раствор аммиака до pH 9. Подщелоченную водную вытяжку переносят во вторую делительную воронку и алкалоиды экстрагируют хлороформом 3 раза по 50, 30 и 20 мл путем легкого взбалтывания в течение 5—7 мин. Хлороформные экстракты объединяют, фильтруют через бумажный фильтр, предварительно смоченный обезвоженным хлороформом, в выпарительную чашку и упаривают досуха в токе воздуха.

Экстракцию в виде оснований применяют только для сухих кормов и высушенных ядовитых растений. Для этого 100 г измельченной пробы смачивают 10%-ным раствором аммиака до слабого увлажнения, переносят в склянку, плотно закрывают и оставляют на 30 мин. По истечении этого срока массу заливают хлороформом в соотношении 1 : 8 и оставляют при комнатной температуре на

425

24 ч. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку и трижды реэкстрагируют 5%-ным водным раствором серной кислоты порциями по 50, 30 и 20 мл. Экстракты объединяют, фильтруют через ватный фильтр, вносят 10%-ный раствор аммиака до pH 9 и вновь извлекают хлороформом, промывая порциями по 30 мл. Хлороформные экстракты объединяют, фильтруют через бумажный фильтр в чашку для упаривания и упаривают досуха в токе воздуха.

Для идентификации алкалоидов сухой остаток одной пробы растворяют в 1 мл хлороформа. Часть полученного раствора наносят на хроматографическую бумагу размером 3 х 7 см микропипеткой. Затем реактивом I и II проявляют бумагу с нанесенными на нее пробами. При анализе алкалоидов в хлороформных экстрактах на бумаге появляются красные или малиновые пятна. В случае появления нечетких пятен проявленную бумагу отмывают водой до обесцвечивания фона, при этом на белой поверхности бумаги четко видны пятна алкалоидов красного цвета. В случае получения положительной реакции на алкалоиды их определяют методом ТСХ.

Затем начинают хроматографирование. На старт хроматографической пластинки микропипеткой или микрошприцем наносят 20 мкл хлороформных экстрактов. Для контроля рядом наносят стандартные растворы алкалоидов или же экстракты из отобранных ядовитых растений. Пластинку помещают в камеру для хрома-тографирования, используя в качестве подвижной фазы смесь хлороформа, ацетона и линопилового эфира фталевой кислоты. Затем пластинку подсушивают и опрыскивают проявляющими реактивами I и II. Алкалоиды проявляются в виде пятен красного или малинового цвета на желтом фоне. Идентификацию алкалоидов, выделенных из кормов, проводят, сравнивая величины Rf пробы и стандартов. Величины Rf некоторых алкалоидов и окраска пятен приведены в таблице 59.
Предыдущая << 1 .. 193 194 195 196 197 198 < 199 > 200 201 202 203 204 205 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed