Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
8.9. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ
Алкалоиды — группа органических веществ, вырабатываемых различными растениями, которые принято называть ядовитыми (белена, красавка, чемерица и др.), содержащие в своей молекуле азот и обладающие высокой физиологической активностью (аконитин, атропин, лупинин, никотин, анабазин). Некоторые из алкалоидов обладают исключительно высокой токсичностью. Так, смертельная доза аконитина для животных при введении внутрь составляет 0,02—0,05 мг/кг (И. А. Гусынин, 1947). Отмечены случаи отравлений крупного рогатого скота и лошадей при поедании сена с примесью чемерицы, содержащей алкалоиды протовератрин и йервин. Для диагностики отравлений исследуют на алкалоиды растительные корма, с которыми связана интоксикация животных. Для определения в кормах алкалоидов в основном используют реакции осаждения и колориметрии.
Принцип. Метод основан на экстракции алкалоидов из щелочной среды хлороформом и идентификации их посредством специфических реакций с различными реагентами — Эрдмана, Ман-делина, Вагнера, Драгендорфа, растворами танина, пикриновой, серной и азотной кислот (Сметов с соавт., 1987).
422
Реактивы: алкалоиды аконитин, атропин, берберин, бруцин, колхицин, кураре, дигитамин, дигитоксин, морфин, никотин, фи-зостиомин, пикротоксин, соланин, стрихнин, вератрин и др.;
аммония ванадат мета (ч. д. а.);
висмута нитрат (ч. д. а.);
йод элементный (ч. д. а.);
калия гидроксид (ос. ч.);
калия йодид (х. ч.);
кислота азотная (х. ч.);
кислота серная (ос. ч.);
кислота хлористоводородная (х. ч.);
кислота пикриновая (ч. д. а.);
3%-ный раствор натрия гидроксида (х. ч.);
реактив I: концентрированная серная кислота;
реактив II: концентрированная азотная кислота;
реактив III (Эрдмана). К 20 мл концентрированной серной кислоты прибавляют азотную кислоту (10 капель кислоты на 100 мл дистиллированной воды);
реактив IV (Манделина). Свежеприготовленный раствор: 0,01 г аммония ванадата в 2 мл концентрированной серной кислоты;
реактив V (Вагнера). 5 г йода в 100 мл 10%-ного раствора калия йодида;
реактив VI: 5%-ный водный раствор танина;
реактив VII: 1%-ный водный раствор пикриновой кислоты;
реактив VIII (Драгендорфа). 8 г висмута нитрата растворяют в 20 мл азотной кислоты, полученный раствор вливают в концентрированный раствор калия йодида (27,2 г соли в 20 мл воды), через сутки фильтруют, объем фильтрата доводят до 100 мл дистиллированной водой;
реактив тимолфталеиновый. В 5 мл дистиллированной воды растворяют 1,5 г калия гидроксида или 1,0 г натрия гидроксида. 0,3 мл приготовленного раствора щелочи смешивают с 14,7 мл свежепро-кипяченной дистиллированной воды, берут 0,1 г свежеперекрис-таллизованного из спирта тимолфталеина и растворяют в 15 мл этанола-ректификата. К полученному раствору тимолфталеина добавляют 5 мл раствора калия или натрия гидроксида. Реактив окрашен в интенсивно-синий цвет. В склянке с притертой пробкой хранят 3 мес;
танин (ч. д. а.);
тимолфталеин (тимолсульфофталеин), индикатор.
Оборудование: весы аналитические и технические; баня водяная; колбы конические различной вместимости и другая посуда и оборудование.
Ход определения. Готовят экстракт для определения алкалоидов (по Габовичу). Пробу массой 1 г тщательно измельчают и переносят в коническую колбу с притертой пробкой на 50 мл, приливают 3 мл 3%-ного раствора натрия гидроксида (для сена — 5 мл,
423
для муки и комбикорма — 15 мл), энергично встряхивают 1 мин. Приливают 10 мл хлороформа (для сена — 15 мл, для отрубей и муки — 25 мл), закрывают пробкой и еще раз встряхивают 3 мин. После отстаивания хлороформ фильтруют через бумажный фильтр в колбу или фарфоровую чашку, содержащую 5 мл воды, подкисленную двумя каплями кислоты хлористоводородной. Хлороформ отгоняют на водяной бане, водный остаток фильтруют и исследуют на алкалоиды.
Для идентификации алкалоидов в несколько пробирок небольшой вместимости (по числу реактивов и проб) вносят по 1 мл испытуемого подкисленного кислотой хлористоводородной раствора или же наносят по 1—2 капли раствора на часовые стекла. Затем добавляют равные объемы реактивов на алкалоиды и наблюдают за изменением окраски или образованием осадка на темном фоне. В присутствии алкалоидов в испытуемой жидкости появляются помутнение, взвесь. Может образоваться осадок, цвет которого зависит от использованных реактивов. Ставят не менее 3—4 групповых реакций с разными реактивами.
При подкислении раствора, содержащего алкалоиды, серной кислотой и обработке реактивом VIII (Драгендорфа) образуются следующие осадки: акониты (хромово-желтый), атропин (красно-желтый), колхицин, морфин (желто-красный), наркотин, никотин, бру-цин, физостигмин, стрихнин (светло-желтый, постепенно темнеет), вератрин (светло-желтый, постепенно темнеет и переходит в канаре-ечно-желтый).
Определение алкалоидов методом TCX (по В. М. Серову, В. А. Волковой, 1979). Принцип. Метод основан на извлечении алкалоидов из растительного материала в виде солей или оснований, их качественной идентификации посредством цветных реакций и последующим полуколичественном определении после разделения в тонком слое алюминия оксида.
