Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Подготовка ячеек планшета. Ячейки планшета заполнить водой и сразу слить ее встряхиванием перевернутого планшета. В каждую ячейку внести по 0,2 мл этилового спирта и через 1 мин слить его встряхиванием. Вновь залить ячейки водой и через 1 мин слить ее встряхиванием.
Приготовление рабочего раствора реактива Т-2-АГ. 3,2 мл воды залить в коническую пробирку, затем туда же влить 0,8 мл реактива «БУФЕР-PI» (концентрат), после этого в пробирку залить 0,02 мл реактива Т-2-АГ. Раствор перемешать и нанести маркировку «АГ». Во все ячейки планшета залить по 0,2 мл рабочего раствора АГ. Планшет накрыть крышкой и поместить его на 16 ч в бытовой холодильник.
Ход определения. Измельченную пробу корма массой 25 г помещают в колбу на 250 мл, заливают 125 мл смеси для экстракции, колбу встряхивают 3—4 раза круговыми движениями и выдерживают в течение 16 ч при комнатной температуре. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр с синей лентой во вторую колбу на 250 мл. Экстракт подвергают колоночной очистке. Для этого в сужающуюся часть закрепленной в штативе пипетки Пастера вкладывают вату, уплотняют ее таким образом, чтобы толщина слоя не превышала 0,3—0,5 см. Засыпают в колонку 1,0 г адсорбента К-3, слой слегка уплотняют постукиванием колонки, а затем вносят в колонку 0,5 мл экстракционной смеси. Колонка готова к работе, как только жидкость опустится до поверхности наполнителя.
Под колонку устанавливают коническую пробирку. После этого с помощью дозатора вносят в колонку 1,0 мл экстракта и продавливают его через слой адсорбента с помощью резиновой груши таким образом, чтобы скорость вытекания экстракта не превышала 1 капля/с. Как только уровень жидкости опустится до уровня поверхности наполнителя, в колонку добавляют 1,0 мл смеси для экстракции и продавливают ее через адсорбент в том же режиме.
После инкубации в холодильнике планшета с рабочим раствором «АГ» раствор сливают встряхиванием. Затем в каждую ячейку микродозатором вносят по 0,25 мл раствора «ОТ», выдерживают в течение 2 мин и сливают встряхиванием. Процедуру повторяют еще 3 раза.
Приготовление рабочего раствора из реактива «БУФЕР-Р2» (концентрат). 9,6 мл дистиллированной воды заливают в коническую пробирку, добавляют 0,4 мл реактива «БУФЕР-Р2» (концентрат), перемешивают и наносят маркировку «Р2».
Приготовление рабочего раствора очищенного экстракта. Микродозатором 0,27 мл раствора Р2 вносят в коническую пробирку, добавляют 0,03 мл очищенного экстракта. Содержимое перемешивают и наносят маркировку, соответствующую номеру пробы.
410
Приготовление растворов из реактива T-2-токсин, аналитический стандарт. В 3 конические пробирки микродозатором заливают 0,27, 0,12 и 0,12 мл смеси для экстракции. Затем 0,03 мл реактива T-2-токсин, аналитический стандарт добавляют в первую пробирку, перемешивают и ставят маркировку «Cl». С использованием нового наконечника 0,03 мл раствора Cl заливают во вторую пробирку, содержащую 0,12 мл смеси, перемешивают и наносят маркировку «С2». 0,03 мл смеси С2 заливают в третью пробирку и наносят маркировку «СЗ».
Приготовление рабочих растворов для калибровки. В 3 конические пробирки внести по 0,27 мл раствора Р2, по 0,03 мл растворов Cl, С2 и СЗ соответственно и нанести маркировки «Kl», «К2» и «КЗ» в соответствии с цифрами в маркировках вносимых растворов. В четвертую пробирку отмерить дважды по 0,27 мл раствора Р2 и залить туда же 0,03 мл смеси для экстракции, нанести маркировку «К0« и перемешать.
Заполнение ячеек с маркировкой «О» и «КО». Микродозатором в 3 ячейки, обозначенные на контуре значками «0» и «КО», внести по 0,1 мл раствора КО, а в ячейку «0» добавить еще 0,1 мл раствора Р2.
Внесение в ячейки рабочих растворов для калибровки очищенных экстрактов. В ячейки, обозначенные на контуре значками «К-1», «К-2» и «КЗ», внести по 0,1 мл растворов Kl, К2 и КЗ, в ячейки, обозначенные на контуре значками «№ пробы», — по 0,1 мл рабочих растворов очищенных экстрактов.
Приготовление рабочего раствора из реактива Т-2-АТ. Дозатором отмерить 2,0 мл раствора Р2 и внести его в коническую пробирку. В ту же пробирку добавить 0,4 мл реактива Т-2-АТ, нанести маркировку «AT» и перемешать.
Внесение рабочего раствора AT в ячейки. Во все ячейки, кроме одной, обозначенной на контуре значком «0», вносят по 0,1 мл раствора AT.
Инкубация. Планшет аккуратно встряхивают, накрывают крышкой и выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре, встряхивая его вручную через каждые 10—15 мин.
Отмывка. Раствор из ячеек слить встряхиванием. Во все ячейки внести по 0,25 мл раствора ОТ, оставить на 2 мин и слить встряхиванием. Процедуру повторить еще 3 раза.
Приготовление рабочего раствора из реактива ФК. 4,0 мл раствора Р2 внести в коническую пробирку, туда же влить 0,02 мл реактива ФК (концентрат), нанести маркировку «ФК». Во все ячейки внести по 0,2 мл рабочего раствора ФК..
Инкубация и отмывка. Планшет аккуратно встряхнуть, накрыть крышкой и выдержать 1 ч при комнатной температуре, встряхивая через каждые 10—15 мин, после чего слить встряхиванием. После этого планшет отмывают раствором ОТ, как это сделано выше.
