Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Ход определения. 25 г измельченного и растертого или гомогенизированного образца тканей животных вносят в колбу Эр-
399
ленмейера на 250 мл, добавляют 5 мл концентрированной кислоты хлористоводородной, перемешивают, дополнительно вносят 50 мл смеси хлороформа и диэтилового эфира (2:1) и встряхивают в течение 20 мин. Затем в колбу всыпают 25 г безводного натрия сульфата. Содержимое колбы перемешивают; отстоявшийся растворитель сливают в колбу на 100 мл, пробу промывают 25 мл смеси растворителей. Экстракты объединяют, фильтруют через вату, промытую 5 мл хлороформа в колбу на 500 мл, добавляют 75 мл смеси 3%-ного раствора натрия бикарбоната и этанола (3:1) и встряхивают в течение 30 мин. Содержимое колбы переносят в делительную воронку на 250 мл. Органическую (нижнюю) фазу сливают, а водную промывают 50 мл хлороформа, встряхивают воронку 1 мин. Хлороформ удаляют. Водную фазу фильтруют через ватный тампон, предварительно промытый 2%-ным раствором натрия бикарбоната, в колбу на 100 мл, куда предварительно вносят 7,5 мл 4 M соляной кислоты.
После окончания реакции выделения диоксида углерода кислый раствор (pH 2) переносят в делительную воронку, в которую добавляют 50 мл эфира. Воронку энергично встряхивают в течение 5 мин. Экстракт фильтруют через ватный тампон и слой (1 см) безводного натрия сульфата в фарфоровую выпарительную чашку или колбу вакуум-ротационного испарителя. Экстракцию повторяют 25 мл эфира, который фильтруют в ту же чашку или колбу. Фильтр промывают 10 мл эфира. Эфир упаривают в токе воздуха, а затем на водяной бане при 60 °С или с помощью вакуум-ротационного испарителя досуха.
При анализе 2,4-Д с помощью TCXсухой остаток после упаривания экстракта растворяют в 0,2—0,3 мл хлороформа и наносят с помощью микропипетки или микрошприца на старт хроматогра-фической пластинки с параллельным нанесением на линию старта 5 и 10 мкг (5 и 10 мкл) 2,4-Д кислоты концентрации 10 мкг/мл. В качестве подвижной фазы используют систему циклогексан-ук-сусная кислота-бензол в соотношении 4:2:1. После разделения пластинку нагревают в течение 10 мин при температуре 130 °С, а затем опрыскивают проявляющим реактивом, после чего еще раз помещают в сушильный шкаф. 2,4-Д проявляется в виде малиновых пятен на желтом фоне с величиной Rf 0,54. Через 12 ч при хранении пластинок на свету пятна становятся темно-коричневыми. Количественную оценку содержания гербицида в пробе проводят путем сравнения величины и интенсивности окраски пятен, полученных из экстракта и стандартного раствора.
При определении 2,4-Д посредством ГЖХ предварительно проводят метилирование гербицида, содержащегося в сухом остатке. Для этого в колбу с сухим остатком приливают 3 мл 5%-ного раствора диметилсульфата в абсолютном метиловом спирте, тщательно ополаскивают стенки колбы, вносят в колбу 1 г безводного натрия сульфата, присоединяют к колбе обратный холодильник и поме-
400
щают на водяную баню температурой 55 °С на 10 мин. После окончания реакции метилирования колбу охлаждают под током водопроводной воды, прибавляют 3 мл насыщенного водного раствора натрия хлорида и 5 мл гексана. Содержимое колбы переносят в делительную воронку на 100 мл, используя 80 мл дистиллированной воды. Метиловые эфиры экстрагируют путем встряхивания воронки в течение 2 мин. После разделения слоев водную фазу удаляют, а гексановый экстракт встряхивают с 15 мл насыщенного раствора натрия хлорида. Органический экстракт переносят в пробирку с притертой пробкой и 5 мкл раствора вводят в газовый хроматограф.
Одновременно готовят стандартный раствор кислоты 2,4-Д. Для этого в колбы вакуум-ротационного испарителя вносят 1, 5 и 10 мг (0,1, 0,5 и 1,0 мл) стандартного раствора 2,4-Д концентрацией 10 мкг/мл. Растворитель упаривают досуха, а пестицид метилируют так же, как и в экстрактах из проб.
Клиническое значение. Обнаружение остатков гербицидов группы 2,4-Д в кормах и содержимом кишечника на уровне, превышающем 50 мг/кг, и в печени более 5 мг/кг служит основанием для постановки диагноза на отравление. Окончательный диагноз на отравление гербицидами этой группы ставят в случае подтверждения данных лабораторного исследования анамнестическими сведениями, клиническими признаками интоксикации (угнетение, отсутствие аппетита, учащенное дыхание, тимпания и скрежет зубами у крупного рогатого скота), а также результатами патолого-анатомического вскрытия павших животных (зернистая и жировая дегенерация печени и почек, гиперемия и кровоизлияния во внутренних органах).
8.5. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РОДЕНТИЦИДОВ (300КУМАРИНА, БРОМАДИОЛОНА, БРОДИФАКУМА, ЦИНКА ФОСФИДА)
Для борьбы с грызунами на животноводческих фермах наиболее широко применяют родентициды из группы антикоагулянтов, производные 4-оксикумарина (зоокумарин, бромадиолон, броди-факум), а также препараты на основе 1,3-индандиона (дифенацин, этилфенацин, изоиндан, хлорфасинон). Все они относятся к ядам кумулятивного действия. Кроме того, в последние годы разрешен к применению яд острого действия — цинка фосфид.