Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Условия хроматографирования: температура колонки и испарителя 165 °С; скорость тока газа-носителя 22 мл/мин, водорода 14, воздуха 400 мл/мин; время удерживания хлорофоса 1,7 мин, ДДВФ 2,2 мин. Минимально детектируемое количество хлорофоса 0,1 нг, ДДВФ — 0,05 нг. Линейность детектирования сохраняется в пределах от 0,15 до 1,5 нг.
Клиническое значение. Обнаружение в патологическом материале (печень, почки, содержимое желудочно-кишечного тракта) любых количеств ФОП дает основание подозревать, что гибель животных произошла в результате их отравления этими веществами. Однако окончательный диагноз на отравление ФОП может быть поставлен, если данные лабораторного исследования подтверждаются анамнестическими сведениями, клиническими признаками интоксикации (нервно-токсический синдром, миоз зрачка глаз) и результатами патологоанатомического исследования павших животных.
395
8.3. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ
Для обработки сельскохозяйственных животных и растений рекомендованы препараты на основе перметрина, циперметрина, дельта-метрина, фенвалерата и др. Большинство синтетических пиретро-идов малотоксичны для сельскохозяйственных животных, в том числе птиц, применяются для обработки в очень низких концентрациях и дозах, сравнительно быстро разрушаются в окружающей среде и организме животных, поэтому отравления пестицидами этой группы очень редки и возможны только в результате грубого нарушения установленных регламентов их применения. Однако синтетические пиретроиды высокотоксичны для рыб и особенно пчел, которые чаще всего могут служить объектами ветеринарного химико-токсикологического исследования. Для определения синтетических пиретроидов в тканях животных (печень, почки, мышцы) и пчелах используют методы на основе TCX и ГЖХ.
Принцип. Методы основаны на экстракции пестицидов из измельченной пробы тканей животных, содержимого желудочно-кишечного тракта, кормов с помощью органического растворителя, на очистке экстрактов в системе жидкость—жидкость, дополнительной очистке на колонках с адсорбентами, их концентрировании и определении пестицидов с помощью TCX или ГЖХ.
Реактивы: ацетон (ч.);
гексан (ч. д. а.);
эфир диэтиловый (х. ч);
натрия сульфат безводный;
хлороформ (ч.);
ацетонитрил (ч.);
бензол (ч. д. а.);
кальция хлорид (х. ч.);
алюминия оксид для хроматографии II степени активности; натрия хлорид (ч.);
25%-ный водный раствор аммиака (ч.); серебра нитрат;
кислота фосформолибденовая (ч. д. а.); спирт этиловый 96%-ный;
проявляющий реагент для ТСХ: 1) 0,5 г серебра нитрата помещают в колбу на 100 мл, растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл 25%-ного раствора аммиака и доводят объем в колбе до 100 мл ацетоном. 2) 10%-ная фосформолибденовая кислота в этиловом спирте;
реагент для ГЖХ: неподвижные фазы — 5%-ный SE-30 на хро-матоне N-AWHDMC (0,16—0,20 мм); 3%-ный ОУ-1 на хроматоне N-AW (0,125—0,160 мм); азот особой чистоты; основной стандартный раствор пиретроидов в гексане 500 мкг/мл. Хранят в холодильнике в течение 6 мес. Рабочие стандартные растворы пиретро-
396
идов в гексане или бензоле концентрацией от 0,1 до 100 мкг/мл. Хранят в холодильнике в течение 2 нед.
Оборудование: колбы конические вместимостью 50 и 250 мл; колбы круглодонные со шлифом для отгонки растворителей; делительные воронки на 50, 100 и 250 мл; воронки; колбы мерные; колонки для адсорбционной хроматографии; аппарат для встряхивания колб; вакуум-ротационный испаритель И-1; камера хромато-графическая; микропипетки на 0,1, 0,2 мл; хроматоскоп (хемос-коп); пульверизатор стеклянный; микрошприцы на 10 мкл; газовый хроматограф «Цвет», «Кристалл», ЛХМ-2000 с детектором по захвату электронов.
Ход определения. 25 г измельченной ткани (мышцы, печень, почки) или содержимого желудочно-кишечного тракта помещают в коническую колбу, заливают 50 мл ацетона и встряхивают в течение 1 ч на шуттель-аппарате. Фильтруют через бумажный фильтр в другую коническую колбу. Вносят в колбу 50 мл холодной дистиллированной воды и ставят на 1 ч в бытовой холодильник. Затем фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу, добавляют в колбу 30 мл гексана и встряхивают на шуттель-аппарате в течение 30 мин. Смесь переносят в делительную воронку. Гекса-новый слой отделяют и переносят в колбу вакуум-ротационного испарителя. Водно-ацетоновый слой дважды промывают 10 мл гексана, который сливают в ту же колбу. Экстракт упаривают досуха. Сухой остаток смывают 3—5 мл гексана, который переносят в мерную пробирку на 10 мл. Колбу еще раз промывают 3 мл гексана и переносят его в ту же пробирку. Сухой остаток растворяют в 200 мкл гексана при анализе посредством TCX и в 5 мл при использовании ГЖХ.
При анализе методом TCX весь объем экстракта наносят на старт хроматографической пластинки, подсушивая под феном пластинку в точке нанесения экстракта. Пластинку помещают в хроматографическую камеру и проводят развитие в системе гек-сан-ацетон (4:1). После развития пластинку подсушивают на воздухе, а затем опрыскивают раствором серебра нитрата или фос-формолибденовой кислоты. При обработке пластинки раствором серебра нитрата пиретроиды проявляются в виде серо-черных пятен, фосформолибденовой кислоты — синих пятен. Нижний предел обнаружения 3—10 мкг. Величина RfB среднем составляет для перметрина 0,6, циперметрина 0,4, фенвалерата 0,3 и дельтаметри-на 0,5. Количественную оценку содержания инсектицидов проводят путем сравнения размера и интенсивности окрашивания пятен из стандартных растворов и анализируемой пробы.
