Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 184

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 178 179 180 181 182 183 < 184 > 185 186 187 188 189 190 .. 246 >> Следующая


После активации пестицидов пластинки подсушивают при комнатной температуре, опрыскивают свежеприготовленным ферментным раствором и инкубируют в термостате, насыщенном водными парами, при температуре 38 °С в течение 40—60 мин. Для насыщения термостата парами в него ставят чашку Петри, заполненную водой. После инкубации пластинку опрыскивают проявляющим раствором и снова ставят в термостат. ФОП проявляются в виде белых пятен на голубом фоне в течение 10—30 мин.

В качестве химических проявляющих реактивов при определении антио, фосфамида, фозалона и хлорофоса на пластинках «Си-луфол» наиболее целесообразно использовать раствор серебра нитрата с 2-феноксиэтанолом. Этот проявляющий реагент готовят следующим образом: в мерной колбе на 100 мл растворяют 1 г серебра нитрата в 2 мл дистиллированной воды, добавляют в колбу 10 мл 2-феноксиэтанола и доводят объем в колбе до метки ацетоном. После этого вводят 2—3 капли пероксида водорода. Пластинки сначала опрыскивают проявляющим реактивом, а затем облучают УФ-лучами, используя лампу ПРК-4. Предел обнаружения составляет для антио, фозалона и фосфамида 0,01 мкг, для хлоро-

393

фоса — 0,1 мкг. При анализе дурсбана, карбофоса, метафоса и ме-тилнитрофоса наилучшие показатели достигнуты при использовании в качестве проявляющего реагента 0,7%-ного раствора 2,6-диб-poM-N-хлорхинонимина в гексане или хлороформе с последующим одновременным облучением пластинки УФ- и ИК-лучами. Предел обнаружения пестицидов составляет от 0,05 до 0,1 мкг в пробе.

Количественное определение содержания пестицидов в пробе при анализе посредством TCX осуществляют путем сравнения площади пятен и интенсивности их окраски при анализе экстрактов и стандартных растворов. Содержание пестицида в пробе (х, мг/кг) рассчитывают по формуле

= AS2V-1000 Х S1V1P '

где А — содержание пестицида в стандарте, мкг; S2 — площадь пятна пробы, мм2; V— общий объем экстракта, мл; 1000 — коэффициент для пересчета на килограммы; S\ — площадь пятна стандарта, мм , V1 — объем экстракта, нанесенного на пластинку, мкл; P — масса пробы, взятой для анализа, г.

Определение ФОП методами ГЖХ. Для определения ФОП в патологическом материале, воде, кормах посредством ГЖХ используют отечественные газовые хроматографы серии «Цвет», «Кристалл», «Газохром» или другие аналогичные приборы отечественных и зарубежных марок, оборудованные термоионным (ТИД) или пламенно-фотометрическим детектором (ПФМД).

Подготовка проб к анализу. Экстракцию, очистку, концентрирование экстракта проводят так же, как и для ТСХ. Однако очищенный экстракт, упаренный досуха, растворяют в 5—10 мл ацетона или этанола. Другие органические растворители (гексан, бензол, хлороформ) при сгорании в пламени детектора образуют копоть, загрязняющую приемный электрод, в результате чего падает чувствительность и воспроизводимость метода.

Принцип. Метод основан на разделении смеси пестицидов или других химических веществ на стеклянных колонках, заполненных жидкой фазой на твердом носителе, через которую пропускают инертный газ, чаще всего азот особой чистоты. Разделенные на колонке химические вещества с током газа-носителя поступают в детектор, реагирующий на определенную группу химических соединений. Для анализа ФОП чаще всего используют вариант пламенно-ионизационного детектора (ТИД) с насаженной на горелку таблеткой с цезия бромидом, реагирующим на ФОП. Сигнал с детектора поступает через усилительную систему на самописец или компьютер, который регистрирует сигнал в виде остроконечных пиков, площадь которых пропорциональна количеству вещества, содержащегося в пробе.

В качестве жидкой фазы при анализе антио, валексона, дурсбана, карбофоса, метафоса, метилнитрофоса, фосфамида и фозалона используют 3- или 5%-ный силанизированный метилсилоксан на

394

хроматоне (SE-30). Применяют также жидкую фазу ХЕ-60 (5%-ную). Колонки стеклянные, 1000 х 3 мм. При анализе неполярных и плохо испаряющихся пестицидов (например, фозалона) газ-носитель — азот особой чистоты со скоростью до 30 мл/мин. Подача водорода — 17—20 мл/мин, воздуха — 300—400 мл/мин. Температуру термостата колонки в зависимости от вида ФОП устанавливают в пределах от 180 до 220 °С, испарителя — 200—220 °С. При определении фозалона температуру термостата колонки и испарителя поддерживают на уровне 230 и 250 °С соответственно. При этих условиях относительное время удерживания (по отношению к метафосу) составляет для антио 1,09 мин, карбофоса и метилнитрофоса — 1,17, фос-фамида — 1,25 и фозалона — 7,23 мин.

Для определения хлорофоса и ДДВФ предложен газоадсорбционный метод, отличающийся от метода ГЖХ тем, что разделение пестицидов проводят не на жидкой, а на твердой фазе, в качестве которой используют полисорб-1 (В. В. Лещев, 1975).

При анализе этим методом пробу патологического материала (печень, почки) массой 10 г тщательно измельчают, помещают в склянку с притертой пробкой, заливают 60 мл ацетона, тщательно перемешивают и ставят в холодильник при температуре 4 °С на 1 ч. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 15 мл смеси ацетон-вода 1:1. Экстракцию повторяют дважды. Экстракты объединяют в делительной воронке на 250 мл и экстрагируют 30 мл хлороформа, тщательно взбалтывая воронку в течение 5—7 мин. Нижний (хлороформный) слой сливают в фарфоровую чашку, добавляют в нее 0,5—1,0 мл этанола и упаривают в токе воздуха до 1,5 мл. Упаренный экстракт переносят в мерную пробирку на 5 мл. Чашку промывают 1 мл ацетона, который сливают в ту же пробирку. Объем в пробирке доводят до метки ацетоном и вводят в газовый хроматограф в количестве 5 мкл.
Предыдущая << 1 .. 178 179 180 181 182 183 < 184 > 185 186 187 188 189 190 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed