Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Доставленный в лабораторию материал начинают исследовать визуально с осмотра, обнаружения в нем посторонних включений. Так, в содержимом желудочно-кишечного тракта могут быть остатки ядовитых растений (веха ядовитого, аконита и др.), по которым можно дать предварительное заключение.
Трупы животных подвергают патологоанатомическому исследованию с оформлением протокола вскрытия, обращая особое внимание на состояние печени и слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта.
Корма подвергают органолептическому анализу на присутствие в нем плесеней, посторонних не свойственных корму данного вида злаков. В силосе определяют pH. Корма, имеющие гнилостный запах с наличием пораженных плесенью участков, должны быть исследованы на содержание микотоксинов. При органолептическом
389
анализе грубых кормов и зерна обращает внимание на наличие головни и спорыньи.
При подозрении на отравления, связанные с недоброкачественными кормами (поражение плесенью, несвойственный запах, цвет), корма подвергают токсикологическому анализу в соответствии с Методическими указаниями по санитарно-токсикологи-ческой оценке и улучшению качества кормов, утвержденными ГУВ MCX СССР от 25.02.1985 г.
8.2. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ
Отравления сельскохозяйственных животных и птиц фосфор-органическими пестицидами (ФОП) чаще всего бывают при их применении для обработки животных с целью защиты от насекомых и клещей в результате завышения доз и концентраций препаратов, а также образования токсичных продуктов в процессе их хранения (нарушение герметизации емкостей, проникновение в них влаги и другие причины). Значительно реже регистрируют отравления животных при использовании ФОП для защиты растений, так как животные не поедают обработанные растения из-за неприятного запаха большинства пестицидов этой группы. Однако при обработке растений вблизи пасек отмечены случаи гибели пчел, которые очень чувствительны к фосфорорганическим инсекто-акарицидам. ФОП в окружающей среде довольно быстро разрушаются и сравнительно не токсичны для рыбы, поэтому отравления рыбы и других гидробионтов пестицидами этой группы сравнительно редки. Отмечены лишь случаи гибели рыбы в результате сброса в рыбоводные водоемы плохо очищенных сточных вод заводов, произвол дящих ФОП.
В настоящее время зарегистрированы и разрешены к применению в качестве средств защиты растений и животных следующие ФОП: актеллик, пиримифосметил; антио; препараты на основе диазинона (базудин, неоцидол, диозол) и фосфамида (БИ-58, ди-метоат); байтекс; хлорофос (негувон, трихлорфон); циодрин; фоза-лон; карбофос (малатион).
Для определения ФОП в патологическом материале, кормах, препаративных формах с целью постановки диагноза на отравление наибольшее распространение получили методы на основе тонкослойной (TCX) и газожидкостной хроматографии (ГЖХ).
Определение ФОП методом ТСХ. Для определения ФОП методом TCX в качестве проявляющих реагентов используют смеси различных химических соединений, таких, как ацетоновые растворы бромфенолового синего и азотнокислого серебра с последующей обработкой пластинки лимонной кислотой; 0,7%-ный раствор 2,6-дибром-г>ї-хлорхинонимина в гексане и некоторые другие. Однако наибольшее применение получили методы с использованием в
390
качестве проявляющего реагента энзимного реактива (М. В. Письменная, 1979; В. В. Карнаухов, 1985).
Принцип. Определение ФОП методом TCX с энзимным проявлением основано на их извлечении из пробы органическим растворителем, очистке осаждением на холоде, концентрировании экстракта, развитии соединения на пластинках с сорбентом и проявлении его с помощью реактива, содержащего фермент холинэс-теразу.
В основе использования энзимного проявителя лежит способность ФОП (производных фосфорной и фосфоновой кислот) подавлять в условиях in vitro активность фермента (энзима) холинэс-теразы. Степень ингибирования активности фермента определяют по уровню расщепления субстрата, в качестве которого используют индоксилацетат или броминдоксилацетат. Если в исследуемой пробе присутствует ФОП, он подавляет активность холинэстеразы, которая, в свою очередь, не расщепляет или слабо расщепляет субстрат. В результате этого на всей поверхности пластинки, где нет ФОП и активность фермента высокая, происходит расщепление субстрата и пластинка окрашивается в голубой цвет. В местах содержания ФОП на голубом фоне они выделяются в виде белых пятен.
Однако производные тио- и дитиокислот фосфора (фосфамид, байтекс, карбофос и некоторые другие) обладают слабой способностью подавлять активность холинэстеразы. Для того чтобы они обладали такой способностью, их активируют с помощью раствора брома, аммиака или путем облучения УФ-лучами. При определении в патологическом материале фосфамида или антио активацию проводят с помощью УФ-лучей, валексона, байтекса, карбофоса, метафоса — водным раствором брома; хлорофоса — водным раствором аммиака.
Реактивы: ацетон (х. ч.);
метилена хлорид (х. ч);
натрия сульфат безводный (ч. д. а.);