Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
раствор № 4 (окрашенная смесь). Равные объемы растворов № 1, 2, 3 последовательно смешивают и в случае появления мути отфильтровывают. Смесь хранят в темном месте при температуре 15—28 °С не более 6 мес;
стандартный раствор фосфата: 4,393 г однозамещенного калия фосфорнокислого, высушенного при температуре 100—105 °С в течение 1 ч, растворяют в стакане или колбочке вместимостью 1000 см3, объем раствора доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают и хранят в стеклянной банке с притертой пробкой в течение одного года. В 1 см3 основного раствора содержится 1 мг фосфора;
растворы сравнения. В мерные колбы вместимостью 500 см из бюретки на 50 см приливают стандартный раствор фосфата в объемах, указанных в таблице 57. В каждую пробу добавляют 5 см разбавленного (1:1) раствора кислоты хлористоводородной, доводят объем дистиллированной водой до метки, перемешивают. Хранят не более 3 мес при температуре 15—28 °С в местах, защищенных от прямых солнечных лучей.
При приготовлении растворов сравнения при анализе кормов животного происхождения в мерные колбы вместимостью 500 CM3 приливают основной раствор калия фосфата в объемах, указанных в таблице 57. В каждую колбу добавляют 5 см концентрированной
374
57. Основной раствор калия фосфата
N° колбы
Объем стандартного раствора фосфора, см3
Масса фосфора в 100 см3 раствора сравнения, мг
2 3 4 5 6 7 8
0 3 5
10 20 30 40 50
0
0,6 1,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0
азотной кислоты, 25 см разбавленной (1:1) кислоты хлористоводородной, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают.
Ход определения. В предварительно прокаленный, охлажденный в эксикаторе и взвешенный с погрешностью не более 0,001 г тигель берут навеску испытуемой пробы, приготовленной по пункту 1, массой 0,5—2,0 г (для кормов животного происхождения берут навеску массой 0,3—0,4 г) в зависимости от ожидаемого содержания фосфора. Тигель помещают в холодную муфельную печь и повышают температуру до 200—250 °С (до появления дыма). Допускается предварительное сжигание пробы на электрической плитке, песочной бане или газовой горелке, при этом следует избегать воспламенения пробы, помещая тигели на асбестовую сетку.
После прекращения выделения дыма температуру в печи увеличивают до 525 + 25 °С и ведут прокаливание 4—5 ч, затем тигели с золой охлаждают. Отсутствие несгорающих частиц угля и равномерный светло-серый (иногда розовый, зеленоватый или голубоватый) цвет золы указывают на полное озоление навески. В противном случае золу осторожно смачивают несколькими каплями дистиллированной воды, приливают 1—2 см3 пероксида водорода (1 : 9) и содержимое тигля с золой снова помещают в печь, прокаливают при температуре 525 ± 25 °С еще в течение 1 ч. Затем тигели охлаждают, золу смачивают несколькими каплями дистиллированной воды, добавляют 1 см3 кислоты хлористоводородной (1:1) и 5—10 см дистиллированной воды, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и переносят, не фильтруя, через воронку в мерную колбу вместимостью 100 см3. Тигель и воронку обмывают водой, доводят раствор водой до метки, перемешивают и дают осадку отстояться. Аликвоту для анализа берут, не взмучивая осадка. Подготовка контрольного раствора (холостое определение) включает все стадии анализа, кроме взятия навески.
Золу, полученную при сжигании костной, мясокостной или рыбной муки, смачивают несколькими каплями дистиллированной воды, приливают 1 см3 концентрированной азотной кислоты, затем 5 см3 разбавленного (1:1) раствора кислоты хлористоводородной, доводят до кипения, охлаждают и содержимое тигеля перено-
375
сят, не фильтруя, через воронку в колбу вместимостью 100 CM , доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают.
Из раствора озолята анализируемых проб пипеткой берут по 10 см3 раствора и переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 добавляют 5 см3 раствора азотной кислоты (раствор № 1) и 15 см3 окрашивающего раствора № 4, доводят дистиллированной водой до метки. После каждого добавления растворов и воды растворы тщательно перемешивают.
Через 30 мин окрашенные растворы сравнения фотометрируют против нулевого раствора шкалы (раствор № 1), не содержащего фосфор, а испытуемые зольные растворы анализируемых образцов — относительно контрольного (холостого) раствора.
Фотометрирование проводят в кювете с толщиной просвечиваемого слоя 5—20 мм, используя синий светофильтр с максимумом светопропускания в области 440—405 нм. Если оптическая плотность испытуемого раствора превышает оптическую плотность раствора сравнения, анализируемый раствор разбавляют нулевым раствором шкалы до оптимальной для фотометрирования концентрации (оптическая плотность 0,2—0,8) и повторяют описанные выше операции в том же порядке. Полученный результат увеличивают во столько раз, во сколько был разбавлен раствор анализируемой пробы.
По результатам фотометрирования растворов сравнения строят градуировочный график, откладывая на оси абсцисс содержание фосфора в 100 см3 растворов сравнения в миллиграммах, на оси ординат — соответствующее значение оптической плотности.
