Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Пробы отбирают по ГОСТ 27262—87, а подготавливают по ГОСТ P 21419-99.
Ход определения. Навеску воздушно-сухих проб массой от 0,5 до 2,0 г, а влажных и (или) неоднородных проб от 2,5 до 5,0 г переносят в колбу Кьельдаля соответствующей вместимости (обычно 800 см3). Добавляют 15 г калия сульфата и катализатора: 0,3 г меди II оксида или от 0,9 до 1,2 г 5-водной меди сульфата. Добавляют 25 см серной кислоты для первого грамма сухого вещества навески и от 6 до 12 см3 для каждого дополнительного грамма сухого вещества. Тщательно перемешивают, чтобы полностью смочить навеску.
Колбу устанавливают наклонно под углом 30—40° к вертикали. Во время нагревания колба должна находиться в этом положении (под вытяжным шкафом!). Сначала ее нагревают умеренно, чтобы предотвратить поднятие пены до горла колбы или выбрасывания ее из колбы.
363
Примечания. 1. Желательно добавить в колбу антипенообразо-вывающие вещества, например парафиновую смолу. 2. Блок для сжигания является аппаратом, обеспечивающим равномерное нагревание разлагаемой смеси.
Нагревают умеренно, время от времени поворачивая колбу до тех пор, пока не исчезнет пена. Затем нагревание усиливают, пока не установится равномерное кипение. Нагревание считается достаточным, если кипящая серная кислота конденсируется в середине колбы Кьельдаля.
Следует избегать перегрева стенок колбы, находящихся в контакте с жидкостью. Если используют открытое пламя, такой перегрев можно предотвратить путем установления колбы на лист асбеста с отверстием, диаметр которого немного меньше диаметра колбы на уровне жидкости.
После осветления жидкости до светлого зелено-голубого цвета колбу нагревают еще в течение 2 ч. Оставляют остывать. Если ми-нерализат начинает застывать, добавляют немного дистиллированной воды и перемешивают круговыми движениями. Осторожно добавляют в колбу 250—300 см* дистиллированной воды для полного растворения сульфатов. При необходимости ускоряют растворение путем нагревания колбы в теплой воде. Перемешивают круговыми движениями и оставляют остывать. Затем добавляют немного вещества, предотвращающего выбрасывание при отгонке аммиака.
В приемную колбу отгонного аппарата приливают 25 см3 серной кислоты, выбирая ее концентрацию в зависимости от ожидаемого содержания азота в навеске. Добавляют от 100 до 150 см дистиллированной воды и несколько капель смешанного индикатора.
При отгонке с борной кислотой в приемную колбу переносят от 100 до 250 см3 борной кислоты и добавляют несколько капель смешанного индикатора. (Рекомендуется непрерывно титровать аммоний во время отгонки, так как это позволяет уточнить конец дистилляции.)
Кончик трубки холодильника погружают на глубину не менее 1 см в жидкость, содержащуюся в приемной колбе. Медленно по стенке в отгонную колбу вводят 100 см3 раствора натрия гидроксида.
Колбу немедленно присоединяют к отгонному аппарату и нагревают с такой интенсивностью, чтобы за 30 мин собрать около 150 см дистиллята. По истечении этого времени лакмусовой бумагой проверяют pH дистиллята на кончике холодильника. Если реакция щелочная (бумага синеет), отгонку продолжают.
Кончик трубки холодильника сразу после окончания дистилляции вынимают из жидкости, чтобы предотвратить обратное засасывание.
Если в качестве поглощающей жидкости использовалась серная кислота, избыток серной кислоты в приемной колбе титруют рас-
364
твором натрия гидроксида соответствующей концентрации c(NaOH) = 0,1 моль/дм3 или c(NaOH) = 0,25 моль/дм3 до конечной точки, определяемой на pH-метре или по изменению окраски раствора из зеленой в фиолетовую.
Если в качестве поглощающей жидкости использовалась борная кислота, аммоний титруют серной кислотой соответствующей концентрации C(H2SO4) = 0,05 моль/дм3 или C(H2SO4) = 0,125 моль/дм3 до конца титрования, определяемого при помощи pH-метра или по изменению окраски раствора из зеленой в фиолетовую.
Одновременно проводят холостое определение, используя вместо навески около 1 г сахарозы.
Контрольный анализ проводят путем определения содержания азота в ацетанилиде или триптофане, добавляя 1 г сахарозы. Выбор вещества для контрольного анализа зависит от того, насколько легко озоляются испытуемые пробы. Ацетанилид озоляется легко, в то время как триптофан сжигается труднее. Обнаружение азота ацетанилида должно составлять не менее 99,5 % и триптофана — не менее 99,0 %.
Вычисление массовой доли азота. Отгонка аммиака в серную кислоту. Если для поглощения аммиака при анализе испытуемой пробы и холостом определении взяты одинаковые объемы серной кислоты, массовую долю азота в испытуемой пробе вычисляют по формуле
_ (V0-VQC1M W™--т- '
где Wfii — массовая доля азота, г/кг; V0 — объем раствора натрия гидроксида, использованный для титрования при холостом определении, см3; Vy — объем раствора натрия гидроксида, использованный для титрования при анализе пробы, см3; С] — концентрация раствора натрия гидроксида, использованного для титрования, моль/дм3; М— молярная масса азота, г/моль (M= 14 г/моль); т — масса навески, г.
