Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 154

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 148 149 150 151 152 153 < 154 > 155 156 157 158 159 160 .. 246 >> Следующая


327

Скорость образования аммиака и его концентрация в содержимом рубца определяются обеспеченностью рационов энергией и использованием аммиака рубцовой микрофлорой для синтеза белка. Установлено, что максимальная скорость синтеза белка микроорганизмами бывает при концентрации аммонийного азота в рубце в пределах от 5 до 20 мг/100 мл (от 2,8 до 11,0 ммоль/л). При концентрации выше 50 мг/100 мл (27,5 ммоль/л) аммиак начинает интенсивно всасываться в кровь. Большая часть его в печени превращается в мочевину (орнитиновый цикл), некоторое количество мочевины синтезируется из аммиака в почках (цикл Кребса—Ген-селяйта).

Увеличение образования аммиака в рубце наблюдается при нарушении соотношения в кормах рациона между легко- и труднорастворимым протеином (оптимальным является 50—60 % легкорастворимого протеина в начале лактации и 65—70 % в средней и последней трети лактации); при скармливании зеленой массы люцерны, клевера, озимой ржи; при повышенном уровне нитратов в кормах; использовании углеаммонийных солей, аммиачной воды; скармливании некачественного силоса и сенажа, в которых содержание аммонийного азота может составлять 35—50 % общего азота. Кроме того, в этих случаях pH содержимого рубца смещается в щелочную сторону, что увеличивает скорость всасывания аммиака в кровь.

Обезвреживание аммиака нарушается при патологии печени (гепатит, цирроз, гепатодистрофия) вследствие уменьшения синтеза мочевины. Количество его в крови увеличивается (гипераммо-ниемия): в артериальной до 20—129 мкмоль/л, в венозной до 12—85 мкмоль/л (у здоровых коров 7,0—30,0 и 5,5—25 соответственно). Аммиак легко проникает через гематоэнцефалический барьер и его количество в ликворе может составить 40—64 мкмоль/л против 8,5 мкмоль/л у здоровых коров (В. В. Влизло, 1998). Соли аммония резко угнетают обмен ацетилхолина, и у животных развивается печеночная энцефалопатия и печеночная кома.

Накапливающийся в тканях аммиак блокирует цикл Кребса, что неминуемо ведет к нарушению окислительно-восстановительных процессов в организме, т. е. к состоянию гипоксии. Угнетение тканевого дыхания имеет следствием нарушение синтеза макроэр-гических соединений (АТФ, КФ). Полагают, что это может быть связано с блокированием а-кетоглутаровой кислоты вследствие активирования процесса восстановительного аминирования или угнетения активности ферментов, участвующих в окислительном декарбоксилировании а-кетокислот (В. С. Калашников, 2000). Влияние аммонийного азота на организм моногастричных животных значительно сильнее вследствие отсутствия у них гепаторе-нальной системы обмена азота.

328

6.8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРИТОВ В ЖИДКОСТИ РУБЦА

Принцип. Метод базируется на реакции Грисса, по которой при взаимодействии реактива Грисса с ионами NO2 образуется окрашенный раствор; интенсивность окраски зависит от концентрации нитритов.

Реактивы: 0,3 н. раствор Ba(OH)2;

5%-ный раствор цинка сульфата;

фенолфталеин (индикатор);

5%-ный раствор аммиака;

0,1 н. раствор кислоты хлористоводородной (HCl); 96%-ный этиловый спирт; сульфаниловая кислота; а-нафтиламин;

12%-ный раствор кислоты уксусной;

реактив Грисса. Состоит из равных объемов двух растворов; а) 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 150 мл 12%-ного раствора уксусной кислоты; б) смешивают 180 мл 12%-ного раствора уксусной кислоты с фильтратом водного раствора а-нафтиламина, полученного при кипячении 0,2 г последнего в 20 мл дистиллированной воды. Хранят раствор в темном месте, а перед употреблением готовят необходимое количество раствора Грисса.

Оборудование: фотоэлектроколориметр или спектрофотометр; мерные колбочки на 100 мл.

Ход определения. Предварительно важно приготовить осадители. Оба раствора [0,3 н. Ba(OH)2 и 5%-ный раствор ZnSO4] должны точно нейтрализовать друг друга по фенолфталеину (объем на объем). Затем осаждают белки рубцовой жидкости. Для этого в пробирки наливают по 2 мл рубцовой жидкости, добавляют такой же объем бария гидроксида и цинка сульфата. Смесь тщательно смешивают и центрифугируют 15 мин при 3000—5000 мин V

20 мл полученного центрифугата переносят в мерную колбу на 100 мл, куда последовательно добавляют 5 мл 5%-ного раствора аммиака, 10 мл 0,1 н. раствора кислоты хлористоводородной и доводят объем до метки дистиллированной водой. Из полученного раствора берут 15 мл и смешивают с 15 мл реактива Грисса. Через 15 мин определяют интенсивность окрашивания на электроколориметре при зеленом светофильтре в кювете на 20 мм. По показаниям экстинкции с помощью калибровочного графика вычисляют содержание нитритов в данном растворе.

Калибровочный график строят по стандартному раствору натрия нитрита (NaNO2) с концентрацией нитрита от 0,1 до 1 мкг в 1 мл.

Расчет количества нитритов в 100 мл рубцовой жидкости ведут по формуле

X = E-1500,

329

где X — количество нитритов в 100 мл рубцовой жидкости, мкг; E — показатель количества нитритов в 1 мл, соответствующих полученной экстинкции; 1500 — произведение 15 • 100, где 15 — число, на которое умножают количество рубцовой жидкости, содержащейся в 20 мл безбелкового фильтрата, чтобы привести к 100 мл рубцовой жидкости; 100 — число, на которое необходимо умножить количество нитритов, найденное по калибровочному графику (E), чтобы определить, сколько нитритов содержится в 20 мл безбелкового фильтрата.
Предыдущая << 1 .. 148 149 150 151 152 153 < 154 > 155 156 157 158 159 160 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed