Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 134

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 246 >> Следующая


Ход определения. В пробирку вносят 5 мл свежеприготовленного рабочего раствора и 0,5 мл ликвора, перемешивают. Через 10 мин интенсивность помутнения измеряют на ФЭКе в кювете с длиной оптического пути 1 см против холостой пробы (0,9%-ного раствора натрия хлорида). Длина волны 410—480 нм (сине-фиолетовый светофильтр). Расчет ведут по калибровочному графику.

Для построения калибровочного графика из калибровочного раствора готовят разведения и обрабатывают их как опытную пробу. В 5 пробирок вносят соответственно 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1 мл раствора альбумина и в каждую из них доливают до объема 10 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Концентрация белка в этих растворах составляет соответственно 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1 г/л. Примечания. 1. Если муть начинает оседать, то перед измерением интенсивности пробирку тщательно встряхивают. 2. Перед определением белка рекомендуется поставить качественную пробу Панди, и если результат реакции оценивается 3+ или 4+ (много белка), то ликвор разводят 0,9%-ным раствором натрия хлорида и при расчете учитывают степень разведения. 3. Прямолинейная зависимость калибровочной кривой сохраняется до 1 г/л. При более высокой концентрации белка в ликворе ее разводят 0,9%-ным раствором натрия хлорида. Клиническое значение. Концентрация общего белка в ликворе повышается при нарушении гемодинамики, воспалительных процессах в головном и спинном мозге и их оболочках. В ликворе, также как в сыворотке крови, общий белок представлен альбуминами и глобулинами.

285

Определение глобулинов по реакции Панди. Принцип. Реакция основана на осаждении глобулинов насыщенным раствором карболовой кислоты.

Реактив: насыщенный раствор карболовой кислоты. 100 г карболовой кислоты растворяют віл воды, встряхивают и помещают в термостате при 37 °С на 6—8 ч. Затем оставляют стоять 7 дней при комнатной температуре, надосадочную жидкость сливают и используют в качестве реактива.

Ход определения. На часовое стекло, помещенное на черную бумагу, наносят 1 мл реактива и по краю наслаивают 1—2 капли ликвора. В случае положительного результата в месте соприкосновения реактива с ликвором образуется молочно-белое облачко, переходящее в муть.

Результаты реакции Панди обозначают четырьмя плюсами: слабая опалесценция 1+, заметная опалесценция 2+, умеренное помутнение 3+, значительное помутнение 4+.

Микроскопия. Микроскопию ликвора проводят в целях определения количества лейкоцитов, эритроцитов, дифференцировки клеточных элементов. Подсчет клеток в камере проводят в течение 1 ч после получения ликвора.

Подсчет лейкоцитов. Принцип. Количество лейкоцитов подсчитывают в счетной камере после разрушения эритроцитов раствором уксусной кислоты.

Реактивы: 10%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым фиолетовым: ледяной уксусной кислоты 5 мл, воды до 50 мл, метиленового фиолетового 0,1 мл.

Оборудование: микроскоп с осветителем; камера Фукса—Розенталя или с сеткой Горяева; смесители для подсчета лейкоцитов (меланжеры).

Ход определения. В меланжер набирают до метки I 10%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым фиолетовым; затем до метки II набирают ликвор. После встряхивания заполняют камеру Фукса—Розентеля содержимым меланжера, предварительно выпустив первую каплю. Камера Фукса—Po-зентеля состоит из 16 больших квадратов, каждый из которых разделен на 16 малых — всего 256 квадратов. Глубина камеры 0,2 мм, общий объем 3,2 мкл.

Лейкоциты считают во всех 256 квадратах и полученное число делят на 3,2 (объем камеры). Результат соответствует количеству форменных элементов в 1 мкл ликвора; кроме того, полученный результат делят на 10/11 (степень разведения ликвора). Таким образом, формула для пересчета выглядит так:

А-11 = А 3,2 - 10 3'

где А — число форменных элементов в объеме 256 квадратов.

286

Для дифференциации лейкоцитов ликвор вначале центрифугируют, затем из осадка делает мазок, фиксируют и окрашивают.

Окраска по Розиной. Спинномозговую жидкость центрифугируют 7—10 мин. Надосадок сливают, осадок помещают на обезжиренное стекло, легким покачиванием распределяют его по поверхности стекла, через 1—2 мин стекло ставят в вертикальное положение, жидкость стекает. В зависимости от предполагаемого количества лейкоцитов осадок располагают на стекле на участке от 1 до 3 см2 и более. При очень большом количестве клеточных элементов и наличии крови осадок распределяют по всей поверхности предметного стекла и тотчас сливают. При этом достигается минимальная толщина мазка.

Мазки высушивают в сушильном шкафу при температуре 40—50 °С. Затем фиксируют метанолом 1—2 мин и красят по Романовскому: тонкий препарат с небольшим цитозом 6—7 мин, с большим цитозом и кровью 10—12 мин. Затем краску сливают, мазок промывают дистиллированной водой и высушивают. Если ядра имеют бледно-голубой цвет, мазок докрашивают еще 2—3 мин. Готовый мазок просматривают под микроскопом.

Кроме лейкоцитов в ликворе обнаруживают плазматические клетки, макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы, опухолевые клетки и др.
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed