Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Запах у мокроты чаще отсутствует. Зловонный запах появляется при гангрене, абсцессе легких, аспирационной бронхопневмонии. В мокроте можно обнаружить кусочки омертвевшей легочной ткани при гангрене легких, частицы опухолей, сгустки фибрина, которые присутствуют при дифтерийном ларингите, крупозной пневмонии.
Микроскопия. Микроскопическое исследование мокроты проводят в нативных и окрашенных препаратах. Материал для исследования выбирают из разных мест и переносят металлической иглой на предметное стекло, покрывают покровным стеклом так, чтобы мокрота не вытекала за его края. Препарат должен быть тонким, элементы в нем должны располагаться однослойно. Просмотр вначале проводят под малым увеличением (объектив х 8, окуляр X Ю), при котором обнаруживают скопление клеток, нити эластических волокон, элементы новообразований, затем под большим увеличением (объектив X 40, окуляр X 10).
Исследование под большим увеличением позволяет обнаружить в значительном количестве лейкоциты (воспалительные, нагнои-тельные процессы), эритроциты в виде желтоватых дисков (легочное кровотечение, застой в малом круге кровообращения), микроорганизмы.
Цилиндрический мерцательный эпителий в небольшом количестве присутствует в каждом образце мокроты, в большом — при трахеите, бронхите, бронхопневмонии.
В эпителиальных клетках специальными методами исследования находят вирусные тельца-включения — хламиди и (хламидиоз-ная бронхопневмония) или микоплазмы (микоплазменная пневмония).
Альвеолярные макрофаги — крупные клетки, в 2—3 раза больше лейкоцитов, в большом количестве появляются в мокроте при воспалении бронхов и легких, застое крови в малом круге кровообращения, пороках сердца. Цитоплазма их содержит различные включения: бесцветные (миелиновые) зерна, желто-коричневые от гемосидерина и др.
Макрофаги можно выявить реакцией образования берлинской лазури. Кусочек мокроты помещают на предметное стекло, прибавляют 1—2 капли 2%-ного раствора кислоты хлористоводород-
281
ной и 1—2 капли 5%-ного раствора желтой кровяной соли. Перемешивают стеклянной палочкой и покрывают покровным стеклом. Излишек реактива удаляют фильтровальной бумагой. Через несколько минут зерна гемосидерина, находящиеся в макрофагах, окрашиваются в синий или сине-зеленый цвет.
В мокроте при распаде легочной ткани обнаруживают эластические волокна. Они имеют вид тонких двухконтурных изогнутых волоконец. Их обнаруживают не в каждой капле мокроты, поэтому прибегают к концентрации:
метод 1: к нескольким миллилитрам мокроты прибавляют такое же количество 10%-ного раствора натрия гидроксида и нагревают до растворения слизи. При этом растворяются слизь, форменные элементы крови, но остаются эластические волокна. Затем к жидкости добавляют 3—5 капель 1 %-ного спиртового раствора эозина, центрифугируют, а осадок исследуют под микроскопом. Эластические волокна сохраняют свою структуру и выделяются ярко-красным цветом. Однако посторонние волокна и нити тоже могут окраситься эозином и мешать распознаванию эластических волокон;
метод 2: наиболее специфической пробой является окраска эластических волокон резорцин-фуксином Вейгерта. Готовят раствор красителя: 0,5 г основного фуксина и 1 г резорцина растворяют в 50 мл дистиллированной воды, нагревают до кипения и постепенно приливают раствор из 2 г железа хлорида в 10 мл воды. Смесь кипятят 5 мин, осторожно встряхивая, после охлаждения фильтруют. Фильтр с осадком переносят в колбу, заливают 70 мл 96%-ного этилового спирта и осторожно нагревают. Осадок краски при этом должен раствориться. После удаления фильтра к охлажденному раствору добавляют 1 мл 25%-ной кислоты хлористоводородной. Хранят краситель несколько месяцев.
Ход определения. Препарат мокроты фиксируют в 96%-ном этиловом спирте в течение 2 мин, сливают спирт, помещают в бюксу с раствором красителя. После окраски препарат ополаскивают водой и выдерживают 2 мин в 96%-ном этиловом спирте, высушивают и микроскопируют под малым увеличением. Эластические волокна окрашиваются в красно-фиолетовый цвет; видны древовидные, ветвящиеся волокна, их обрывки.
В нативных неокрашенных препаратах мокроты можно обнаружить мицелии, характерные для грибов различных видов, поселяющихся в органах дыхания (кандидоз, аспергиллез и др.), а также актиномицеты. Грибы из рода Кандида развиваются в органах дыхания при длительном лечении животных антибиотиками. При поражении легких грибами из рода Кандида в нативном препарате обнаруживают почкующиеся дрожжеподобные клетки и ветвистый мицелий, на котором споры расположены мутовками. Друзы акти-номицетов макроскопически имеют вид мелких желтоватых зернышек, содержащихся в гнойной части мокроты. Микроскопичес-
282
ки они представляют собой сплетения тонкого мицелия, концы которого заканчиваются колбообразными вздутиями. При окраске препарата по Граму нити мицелия грамположительны, колбооб-разные вздутия — грамотрицательны.
Окраска по Граму. Готовят реактивы: карболовый раствор ген-цианового фиолетового: 1 г генцианового фиолетового растворяют в 10 мл 96%-ного этилового спирта, раствор выливают в 100 мл 1—2%-ного раствора карболовой кислоты, взбалтывают; раствор Люголя — 1 г йода, 2 г калия йодида и 300 мл дистиллированной воды; йод и калия йодид растворяют сначала в 5—8 мл воды, а затем приливают оставшуюся воду; 96%-ный этиловый спирт; 10%-ный раствор карболового фуксина: 10 г карболового фуксина и 90 мл дистиллированной воды.
