Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Обнаружение уробилиногена мультитестовыми полосками или Билуген-тестом. Принцип. Стабильная соль диазония (4-меток-сибензенедиазоний флиоборат) реагирует немедленно с уробили-
268
нстеном в кислой среде с появлением окраски. Тест очень чувствителен; предел чувствительности 0,4 мг/100 мл (7 мкмоль/л). Другие вещества мочи не влияют на реакцию. Ложноположитель-ные результаты получают от присутствия в моче феназопиридина.
Присутствие в моче уробилиногена оценивается по изменению цвета от белого до красного через 10 с.
Клиническое значение. Уробилиногенные тела — производные билирубина. Из попавшего в кишечник с желчью связанного билирубина под действием бактерий образуются уробили-нвиды (уробилиногены, уробилины, стеркобилиногены, стеркоби-лины). Уробилиноиды выделяются с калом, часть их реабсорбиру-ется из кишечника в кровь, через систему воротной вены поступает в печень и разрушается. Небольшое количество этих веществ по системе геморроидальных вен, минуя печень, выделяется с мочой. Выделение уробилиноидов с мочой в большом количестве носит название уробилинурии (уробилиногенурия). Уробилину-рию отмечают при гепатите, циррозе печени, гемолитической анемии и других гемолитических состояниях, кишечной непроходимости, запоре.
Обнаружение крови и кровяных пигментов. Кровяные пигменты (гемоглобин, метгемоглобин, сульфгемоглобин, гемосидерин), ми-оглобин обнаруживают бензидиновой пробой, пробой с аммония сульфатом, тест-бумагой и др.
Бензидиновая проба. Принцип. Обнаружение кровяных пигментов путем гемолиза эритроцитов и освобождение из него гемоглобина, который способен отнимать водород от амидоперина, бензидина, гвояколовой смолы и других органических соединений и переносить его на пероксид водорода с образованием окрашенных соединений. Кровяные пигменты извлекаются эфиром.
Реактивы: этиловый эфир;
5%-ный раствор бензидина в ледяной уксусной кислоте; свежий пероксид водорода;
ледяная уксусная кислота; этиловый спирт.
Ход определения. Готовят эфирную вытяжку мочи: к 10—15 мл добавляют 2 мл ледяной уксусной кислоты, 8 мл этилового эфира и 1 каплю этилового спирта, взбалтывают и дают постоять. К 2 мл эфирной вытяжки мочи добавляют 5 капель 5%-ного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте и 8—10 капель пероксида водорода. При наличии крови в моче раствор окрашивается в зеленый цвет.
Проба с гвояколовой смолой. Принцип. Тот же, как и в предыдущем методе.
Реактивы: этиловый спирт;
свежеприготовленный насыщенный раствор гвояколовой смолы в этиловом спирте; пероксид водорода;
269
этиловый спирт.
Ход определения. Подготовка эфирной вытяжки мочи такая же, как указано в предыдущей пробе.
К 2 мл эфирной вытяжки мочи добавляют 6 капель спиртового свежеприготовленного насыщенного раствора гвояколовой смолы и 8 капель свежего пероксида водорода. Появление через 5—8 мин синего окрашивания свидетельствует о наличии в моче крови.
Обнаружение крови по тест-бумаге. Принцип. Тест основан на том, что гемоглобин и миоглобин катализируют окисление окрашенного индикатора с помощью органического пероксида водорода (2,5-диметил-2,5-дигидропероксигексан) с образованием сине-зеленого окрашивания, которое кажется зеленым на желтой тест-бумаге. Неповрежденные эритроциты гемолизируются на тест-бумаге, гемоглобин осаждается и запускает реакцию, которая вызывает по соседству с каждым эритроцитом появление видимых зеленых точек.
Чувствительность пробы очень высокая — 5 эритроцитов в 1 мкл или количество гемоглобина, освобожденное из 10 эритроцитов. Тест специфичен к гемоглобину и миоглобину.
Примечание. Нельзя применять формалин в качестве консерватора мочи. Протеинурия может уменьшить окраску, вызванную гемоглобином.
Клиническое значение. Моча здоровых животных дает отрицательную реакцию на кровяные пигменты. Положительная реакция на них может быть в результате появления в моче крови, гемоглобина, миоглобина. Гематурия наблюдается при гломерулонефрите, мочекаменной болезни, цистите. Гемоглобинурию наблюдают при гемолитических состояниях (кровопаразитарные болезни, отравление гемолитическими ядами), тяжелых инфекционных болезнях.
Проба на миоглобин. Принцип. Метод основан на осаждении гемоглобина аммония сульфатом и способности миоглобина при этом окрашиваться в красно-коричневый цвет.
Реактив: аммония сульфат кристаллический.
Ход определения. В 5 мл мочи растворяют 2,8 г аммония сульфата, смесь фильтруют. Если фильтрат приобретает красно-коричневый цвет, значит, в моче имеется миоглобин, а если фильтрат не окрашен — присутствует гемоглобин.
Моча здоровых животных не содержит миоглобина. Появление миоглобина в моче наблюдается при паралитической миоглобину-рии, травмах мышц.
Обнаружение индикана. Проба Обермайера. В пробирку вносят 6 мл мочи и 6 мл раствора железа хлорида (0,2—0,4 г железа хлористого растворяют в 100 мл концентрированной соляной кислоты). Через 5 мин в пробирку добавляют 1—2 мл хлороформа, содержимое встряхивают. При наличии индикана хлороформ в нижней части пробирки окрашивается в синий цвет.
