Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Реактивы: 10%-ный раствор хлорида бария;
диазореактив: а) диазораствор I: 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в небольшом количестве воды, прибавляют 15 мл концентрированной HCl и доливают до 1000 мл дистиллированной водой; б) диазораствор II: 0,5%-ный раствор натрия нитрата. Непосредственно перед определением смешивают 10 мл диазореактива I и 0,25 мл диазореактива II;
266
96%-ный спирт этиловый;
6%-ный раствор двузамещенного натрия фосфата.
Ход определения. К 10 мл мочи, подкисленной несколькими каплями уксусной кислоты, прибавляют 5 мл 10%-ного раствора бария хлорида, перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр. Фильтр раскладывают на дне чашки Петри и на осадок капают 1—2 капли свежеприготовленной диазосмеси, 4 капли спирта и 1 каплю двузамещенного натрия фосфата. При наличии в моче билирубина появляется красно-фиолетовая окраска.
Примечание. Мешают обнаружению билирубина высокие концентрации в моче уробилиноидов, индикана, нитритов, аскорбиновой кислоты, фенотиозина.
Тест на билирубин с использованием полосок Билуген-тест или мультитестовых полосок. Основан на соединении билирубина со стабильной солью диазония (2,6-дихлорбензендиазония флуобо-рат) в кислой среде с образованием красно-фиолетового окрашивания. Цвет изменяется до фиолетового, причем интенсивность нарастает соответственно концентрации билирубина. Предел чувствительности — 0,5 г/100 мл (9 мкмоль/л) билирубина в моче, не содержащей аскорбиновой кислоты.
Оценка реакции. Наличие билирубина в моче дает переход окраски от белой к розово-бежевой или светло-красно-фиолетовой. Легкое розовое окрашивание принимается за положительную пробу. Другие компоненты мочи, дающие желтоватую окраску, могут слегка изменять оттенок окрашивания. Сравнение окрашивания по шкале: — отрицательный результат; H— слабоположительный; ++ умеренно положительный; +++ сильно положительный результат.
Примечание. Длительное хранение мочи, особенно на свету, вызывает окисление билирубина и ложноотрицатель-ные результаты. Ложноположительные результаты могут быть вызваны лекарствами, окрашивающими мочу в красный цвет. Клиническое значение. У здоровых животных билирубин в моче качественными пробами не обнаруживают. При болезнях печени и желчных путей в моче появляется билирубинглюкоро-нид (связанный с глюкороновой кислотой билирубин — водорастворимый). Билирубинурию наблюдают при гепатите (паренхиматозная желтуха), застое желчи в желчном пузыре и желчных протоках — хо-лестазе (желчнокаменная болезнь, холецистит). Так как несвязанный (непрямой) билирубин водонерастворимый и не проходит через почечный фильтр, то для гемолитической желтухи (гемоспоридиоз-ные болезни, отравления гемолитическими ядами) билирубинурия не характерна.
Обнаружение и определение уробилиноидов (уробилина, уробили-ногена). Проба Флоренса. Принцип. С кислотой хлористоводородной уробилин образует соединение, окрашенное в красный цвет.
267
Реактивы: серная кислота концентрированная; диэтиловый эфир; кислота хлористоводородная концентрированная.
Ход определения. В пробирку вносят 8—10 мл мочи, подкисляют 8—10 каплями концентрированной серной кислоты, перемешивают, затем приливают 2—3 мл эфира, закрывают пробкой, несколько раз осторожно пропускают эфир через слой мочи для экстрагирования уробилина. Затем эфирную вытяжку мочи наслаивают лучше пастеровской пипеткой на 2—3 мл концентрированной кислоты хлористоводородной и помещают в другую пробирку. При наличии уробилина на границе жидкости образуется розовое кольцо. Проба очень чувствительная.
Проба Богомолова. Принцип. Уробилин с меди сульфатом образует соединение красно-розового цвета.
Реактивы: насыщенный раствор меди сульфата (CuSO4 х X 5H2O, ч. д. а.). 23 г вещества растворяют в 100 мл дистиллированной воды;
хлороформ.
Ход определения. В пробирку вносят 10—15 мл мочи, 2—3 мл насыщенного раствора меди сульфата. При появлении помутнения прибавляют несколько капель концентрированной кислоты хлористоводородной до просветления смеси. Через 5 мин приливают 2—3 мл хлороформа, пробирку закрывают пробкой и несколько раз встряхивают. При окрашивании хлороформа в розовый цвет реакция положительная.
Примечание. Обнаружению уробилиноидов мешают билирубин и гемоглобин. В случае их нахождения в моче ее предварительно готовят следующим образом. К 10— 12 мл мочи добавляют 5—6 мл 10%-ного раствора бария хлорида (BaCl2) и фильтруют. Затем фильтрат проверяют на полноту осаждения билирубина. Процедуру повторяют до полного осаждения билирубина.
Проба Нейбауера. Принцип. Проба основана на реакции между уробилиногеновыми телами и реактивом Эрлиха с образованием соединения красной окраски.
Реактив: реактив Эрлиха: 2 г иара-диметиламинобензальдеги-да растворяют в 100 мл 20%-ного раствора кислоты хлористоводородной. •
Ход определения. К нескольким миллилитрам свежей охлажденной до комнатной температуры мочи прибавляют несколько капель реактива Эрлиха. Окрашивание жидкости в первые 30 с свидетельствует о положительной пробе, а появление окраски по истечении 30 с — о нормальном количестве или отсутствии уроби-линогенов.
