Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Оборудование: фотоэлектроколориметр.
Ход определения. В 2 пробирки (опытная и холостая пробы) вносят по 1,25 мл профильтрованной мочи, приливают к опытной пробе до 5 мл 3%-ного раствора сульфасалициловой кислоты, к холостой пробе — до 5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, перемешивают. Через 5 мин измеряют экстинкцию опытной пробы на ФЭКе при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против холостой пробы в кювете с толщиной слоя 5 мм.
Расчет ведут по калибровочному графику с концентрацией белка в растворах от 0,05 до 1,0 г/л. Приготовление растворов калибровочного графика приведено в таблице 44.
264
44. Приготовление растворов
№ пробирки
1
2 3 4 5
Стандартный раствор альбумина, мл
0,05
0,1
0,2
0,5
•,O
0,9%-ный раствор натрия хлорида, мл
9,95
9,9
9,8
9,5
9,0
Концентрация белка, г/л
0,05
0,1
0,2
0,5
1,0
Калибровочная кривая линейна до концентрации 1 г/л. Мочу с более высокой концентрацией белка разводят водой и при расчетах учитывают степень разведения. Этот метод непригоден для определения белка в моче, содержащей контрастные вещества, большое количество мочевой кислоты.
Концентрацию белка в моче можно определять биуретовым методом (см. Исследование крови).
Клиническое значение. Различают протеинурию прере-нальную, связанную с усиленным распадом белка тканей (паралитическая миоглобинурия), выраженным гемолизом (гемоспориди-озные болезни, отравления гемолитическими ядами); ренальную, обусловленную патологией почек, которая разделяется на клубоч-ковую и канальцевую; постренальную, связанную с патологией мочевыводящих путей.
Появление в моче большого количества белка обусловлено прежде всего повышением фильтрации белков через клубочковый капиллярный фильтр, а также снижением их канальцевой реабсорб-ции. Протеинурия, связанная с нарушением клубочковой проницаемости (клубочковая протеинурия), наблюдается при большинстве заболеваний почек — первичных и вторичных гломерулонефритах, вторичном амилоидозе почек, диабетическом гломерулосклерозе, тромбозе почечных вен, атеросклеротическом нефросклерозе. Временная, коротко протекающая протеинурия наблюдается при лихорадочных и острых токсических поражениях почек.
Длительная протеинурия характерна для хронического гломеру-лонефрита, вторичного амилоидоза почек; может наблюдаться месяцами и годами.
Функциональная протеинурия наблюдается при беременности, большой физической нагрузке, перегревании, переохлаждении, дегидратации, стрессе. Она связана с влиянием этих факторов на почечную гемодинамику, в результате чего повышается проницаемость гломерулярных капилляров. Она исчезает после устранения причин, ее вызывающих. Канальцевая протеинурия — результат нарушения процессов реабсорбции белков первичной мочи (ультрафильтрата). Она характерна для хронических интерстициаль-
265
ных нефритов, вызванных отравлением солями свинца, ртути, острой почечной недостаточностью.
Смешанная протеинурия обусловлена сочетанием гломеруляр-ных и тубулярных механизмов, имеющих место при гломерулонефритах, диабетической нефропатии, пиелонефрите и вторичном амилоидозе почек.
Инфраренальная (секреторная) протеинурия обусловлена повышенной секрецией разных белков клетками тубулярного эпителия, а также слизистой оболочкой и железами мочеполовых органов, наблюдаемой при пиелонефрите, интерстициальном нефрите, простатите. Протеинурия сочетается с патологическими изменениями осадка мочи.
Обнаружение билирубина. Для обнаружения билирубина в моче используют пробы Фуше, Розина, Готфрида, полоски Билуген-тест и др. Образцы утренней мочи оберегают от действия прямого солнечного света. Обнаружение билирубина в моче в большинстве проб основано на его превращении под действием окислителя в зеленый биливирдин или другие соединения определенного цвета.
Проба Фуше. Принцип. Метод основан на окислении билирубина железа хлоридом в биливирдин и появлении зеленовато-синего или голубоватого окрашивания.
Реактивы: 15%-ный раствор бария хлорида;
реактив Фуше. 25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в - 100 мл дистиллированной воды и приливают 10 мл 10%-ного раствора хлорного железа (FeCl3).
Ход определения. К 10—12 мл мочи прибавляют 5 мл 15%-ного раствора бария хлорида, смешивают, фильтруют. На вынутый из воронки и расправленный на сухой фильтровальной бумаге или в чашке Петри фильтр наносят 2—3 капли реактива Фуше. Появление на фильтре сине-зеленых пятен свидетельствует о присутствии билирубина. Если реакция мочи щелочная, то необходимо подкислить ее несколькими каплями уксусной кислоты.
Проба Розина. Реактив: 1%-ный спиртовый раствор йода.
Ход определения. В пробирку наливают 4—5 мл мочи и осторожно по стенкам пробирки наслаивают раствор йода. Появление на границе между жидкостями зеленого кольца свидетельствует о наличии билирубина.
Проба Готфрида. Принцип. Связанный с глюкороновой кислотой билирубин при соединении с диазотированной сульфаниловой кислотой (циазобензосульфоновая кислота) дает розовую окраску.
