Стрессовый белок БХШ 310: характеристика и функции в растительной клетке - Колесниченко А.В.
ISBN 5-98000-005-4
Скачать (прямая ссылка):
контроля было отмечено у митохондрий кукурузы. Напротив, добавление анти-
БХШ 310 антисыворотки к митохондриям гороха не вызвало изменений
коэффициента дыхательного контроля (табл. 19) (Kolesnichenko et al.,
2001с).
Ка к по казано ранее, БХШ 310 и иммунохимичес ки родственные ему белки
обнаружены у не которых видов злаков (Kolesnichenko et al., 1999). При
этом по казано, что содержание БХШ 310 различается у исследованных видов
злаков. Наиболее высо кая концентрация БХШ 310 была установлена в
цитоплазматичес ких белках озимой ржи. У озимой пшеницы было отмечено
более низкое содержание БХШ 310. У ку курузы среди цитоплазматичес ких
белков обнаруживались только более низкомоле кулярные иммунохимичес ки
родственные БХШ 310 белки, а БХШ 310 обнаружен толь ко в митохондриях. В
связи с этими данными можно предположить, что добавленное к митохондриям
ограниченное количество антисыворотки оказалось в состоянии
преципитировать пра ктичес ки весь БХШ 310 в митохондриях ку курузы.
Соответственно, у них наблюдались наиболее сильное уменьшение с корости
дыхания в состоянии 4 и максимальное возрастание коэффициента
дыхательного контроля (табл. 19). У озимой пшеницы добавленное количество
антисыворотки о казалось в состоянии преципитировать толь ко часть
митохондриального БХШ 310, соответственно, и эффе кт ее добавления был
меньше (табл. 19). У озимой ржи, содержащей наибольшее количество БХШ
119
Таблица 19
Влияние антисыворотки против БХШ 310 на скорость нефосфорилирующего
дыхания и дыхательный контроль митохондрий некоторых видов растений.
Субстрат окисления -10 мМ малаг. М±т, п=6
Виды Скорость дыхания в состоянии 3* Скорость дыхания в состоянии 4*
Дыхательный контроль
Без добаЕок С неиммунной сывороткой С сывороткой против
БХШ 310 Без добаЕок С неиммунной сывороткой С сывороткой против
БХШ 310
Кукуруза 86,62+6,33 19,25+2.91 18,84+2.05 12,37+2.62 4,50+0.23
4,59+0.20 7,00+0.29
Рожь 81,43+4.07 32,04+3.55 30,24+3.71 22,69+2.88 2,54+0.13 2,69+0.14
3,59+0.21
Пшеница 102,12+8.98 26,64+2.34 26,64+2.55 21,47+2.14 3,83+0.18
3,83+0.16 4,76+0.25
Горох 71,41+3,57 19,56+2.78 19,45+2.2 5 19,56+2.05 3,65+0.15 3,67+0.18
3,65+0.16
* нмоль 02/мин/мг белка
310, добавленные антитела преципитировали толь ко
небольшую часть этого белка, поэтому эффект добавления антисыворотки был
самым низ ким (табл. 19).
В виду отсутствия эффекта при добавления антисыворотки против БХШ 310 к
митохондриям гороха, можно сделать вывод об отсутствии иммунохимически
родственных БХШ 310 белков с разобщающей а ктивностью в проростках гороха
(табл. 19) (Kolesnichenko et al., 2001с).
Для того, чтобы определить, зависит ли действие анти-БХШ 310
антисыворотки от количества добавленных к митохондриям антител, был
проведен э ксперимент по добавлению к инкубируемым в ячейке полярографа
митохондриям озимой ржи различных количеств анти-БХШ 310 антисыворотки.
Полученные результаты по казывают, что сопрягающий эффе кт антисыворотки
возрастает с увеличением ее добавляемого количества (рис. 45).
Рис. 45. Влияние количества добавленной к митохондриям анти-БХШ 310
антисыворотки на дыхательный контроль
митохондрий озимой ржи.
окисления
и
Варианты
Наиболее высокое сопряжение фосфорилирования было отмечено при добавлении
4.8 мг антисыворотки к инкубируемым в состоянии 4 митохондриям (рис. 45).
Усиление эффекта сопряжения с увеличением количества добавленной
антисыворотки показывает, что в ходе э кспериментов наблюдается
преципитация БХШ 310,
121
ассоциированного с инкубируемыми митохондриями и вызывающего эффект
разобщения окисления и фосфорилирования (Kolesnichenko et al., 2001c).
Известно, что все "классические" разобщающие белки растений и животных
принадлежат к семье митохондриальных переносчиков анионов (Jezek et al.,
1998). Следовательно, их активность in vitro зависит от присутствия
свободных жирных кислот в среде инкубации митохондрий (Jezek et al.,
1998). Известно также, что БСА, эффективно связывающий жирные кислоты,
является ингибитором всех "классических" растительных разобщающих белков
(Palou et al., 1998). Если предположить, что БХШ 310 функционирует так
же, как и другие известные разобщающие белки, то следовало бы ожидать,
что добавление БСА в среду инкубации митохондрий удалило бы свободные
жирные кислоты из среды инкубации и элиминировало разобщающий эффект БХШ
310. Следовательно, добавление БСА в среду инкубации вызвало бы
уменьшение сопрягающего эффекта анти-БХШ 310 антисыворотки. Для выяснения
этого вопроса были проведены эксперименты с последовательным добавлением
к находящимся в состоянии 4 митохондриям БСА в концентрации, вызывающей
полное ингибирование разобщающей активности всех известных разобщающих
растительных белков, и анти-БХШ 310 антисыворотки в наиболее эффективной
концентрации. Полученные данные показывают, что сопрягающий эффект
добавления анти-БХШ 310 антисыворотки не зависит от присутствия БСА в
среде инкубации (табл. 20). Эти данные подтверждают, что разобщающее
