Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Колесниченко А.В. -> "Стрессовый белок БХШ 310: характеристика и функции в растительной клетке" -> 27

Стрессовый белок БХШ 310: характеристика и функции в растительной клетке - Колесниченко А.В.

Колесниченко А.В., Грабельных О.И., Побежимова Т.П., Колесниченко В.В. Стрессовый белок БХШ 310: характеристика и функции в растительной клетке — Арт-Пресс , 2004. — 225 c.
ISBN 5-98000-005-4
Скачать (прямая ссылка): stressoviybelokbhsh2004.pdf
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 72 >> Следующая

растений.
Принимая во внимание этот факт, было проведено изучение зависимости
нефосфорилирующего дыхания от концентрации стрессовой формы БХШ 310 в
среде ин кубации митохондрий. В этих экспериментах эффективность
взаимодействия БХШ 310 с митохондриями характеризовали по скорости
нефосфорилирующего дыхания и по отношению АДФЮ. Зависимость этих
параметров от относительной концентрации БХШ 310 оценивали через 5 и 60
мин ин кубации митохондрий с БХШ 310 при 00С. Ка к показано на рис. 39,
скорость дыхания в состоянии 4 у митохондрий,
ин кубируемых при 0 0С ка к в течение 5, та к и в течение 60
мин, увеличивалась с увеличением концентрации
добавленного белка. Та к, при увеличении концентрации белка от 90 до 250
м кг на 1 мг митохондриального белка через 5 мин ин кубации она
увеличилась с 24.55±1.63 до 31.0±1.70 нмоль 02/мин/мг белка (рис. 39).
Дальнейшее увеличение концентрации от 250 до 750 мкг/мг белка к
значительному увеличению скорости дыхания в состоянии 4 не приводило.
Разница в изменении скорости дыхания в состоянии 4 между этими вариантами
опыта составляла всего 2.6 нмоль 02/мин/мг белка. В то же время при 60
мин инкубации митохондрий скорость дыхания в состоянии 4 увеличивалась
почти пропорционально увеличению концентрации
добавленного к ним белка (рис. 39). При этом концентрационно - зависимое
увеличение скорости нефосфорилирующего дыхания носило монотонный хара
ктер. Отношение АДФЮ при этом уменьшалось пропорционально увеличению
концентрации добавленной стрессовой формы БХШ 310 (рис. 40). Уменьшение
величины АДФ:0 наблюдали ка к после 5 мин, та к и после 60 мин ин кубации
митохондрий со стрессовым белком. Такое концентрационно - зависимое
уменьшение отношения АДФЮ у митохондрий указывает на уменьшение
эффективности окислительного
85
фосфорилирования с увеличением концентрации стрессовой формы БХШ 310.
Следует отметить, что скорость дыхания митохондрий в состоянии 3
оставалась неизменной на протяжении всего времени ин кубации в этих
условиях. Анализ полученных результатов позволяет сделать вывод, что
разобщение митохондрий, вызванное добавлением стрессовой формы БХШ 310
при гипотермии in vitro зависит от его концентрации.
Рис. 39. Влияние различных концентраций БХШ 310 на потребление кислорода
в состоянии 4 во
? 5 мин времяинкубации
? 60 ми н-митохондрий озимой ---------- птттеницыт в течение 5
и 60 мин при 00C. Субстрат окисления: малат (10 мМ) в присутствии
глутамата (10 мМ). M±m, n=6
Ранее показано (Kolesnichenko et al., 2000а), что при хранении препаратов
изолированных клеточных органелл нативные белки, иммунохимически
родственные БХШ 310 и состоящие из одних и тех же субъединиц, нестабильны
и переходят из одной формы в другую. Учитывая этот факт, а также то, что
процедура выделения стрессового разобщающего белка БХШ 310 весьма
продолжительна, можно предположить, что при выделении и хранении
препаратов конститутивно синтезируемой формы БХШ 310 происходит
отщепление лиганда. Учитывая вышесказанное, можно также предположить, что
значительная доля разобщающей
86
а ктивности конститутивно синтезируемой формы БХШ 310 обусловлена
присутствием в белковом препарате распавшейся до стрессовой формы
конститутивно синтезируемой формы БХШ 310. Косвенным подтверждением этому
служит то, что к 90 мин ин кубации наблюдаемые разобщающие а ктивности
стрессовой и конститутивно синтезируемой форм БХШ 310 сравниваются.
Значительная разница в а ктивности этих форм наблюдалась толь ко в начале
ин кубации (Войни ков и др., 2001а).
3,0 т---------------------------------------------
(c)
5
ш
=
х
ш
3
о
Ё 2,0
1,5 -|--^-|--------^-|-------^-\--------^-|-------^-
90 175 250 500 750
икг БХШ 310 на иг интохондриал ьного белка
Рис. 40. Влияние различных концентраций БХШ 310 на отношение АДФ:0 во
время инкубации митохондрий озимой пшеницы1 в течение 5 и 60 мин при 00C.
Субстрат окисления: малат 10 мМ + глутамат 10 мМ. M±m, n=6.
Данные, полученные при изучении зависимости разобщения окисления и
фосфорилирования от концентрации БХШ 310, гораздо более трудно
интерпретировать. В целом, эффект разобщения БХШ 310 линейно зависит от
его относительной концентрации в среде инкубации митхондрий. В то же
время в первый момент инкубации митохондрий наблюдается определенный
триггерный эффект.
87
12 МЕХАНИЗМ РАЗОБЩАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ БХШ 310 ОТЛИЧАЕТСЯ ОТ МЕХАНИЗМА
ДЕЙСТВИЯ ИЗВЕСТНЫХ РАЗОБЩАЮЩИХ БЕЛКОВ
Известно, что в митохондриях растений имеется ряд систем, способных при
своем функционировании снижать степень сопряженности окисления и
фосфорилирования (Siedow, Umbach, 2000; Ricquier, Bouillaud, 2000a).
Исторически первой из них была открыта альтернативная цианидрезистентная
оксидаза (Siedow, Umbach, 2000). Относительно недавно в митохондриях
растений были также открыты митохондриальные UCP-подобные разобщающие
белки, гомологичные разобщающим белкам животных (Ricquier, Bouillaud,
2000a). В связи с этим необходимо было установить, не является ли
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 72 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed