Стрессовый белок БХШ 310: характеристика и функции в растительной клетке - Колесниченко А.В.
ISBN 5-98000-005-4
Скачать (прямая ссылка):
58
При сравнении спектров митохондриальных и цитоплазматичес ких
иммунохимичес ки родственных БХШ 310 белков обнаруживается, что, если в
спектрах цитоплазматичес ких белков исследованных видов, особенно в
высокомолекулярной области, наблюдается значительный полиморфизм (рис.
21), то, ка к отмечено выше, спектры митохондриальных иммунохимичес ки
родственных БХШ 310 белков значительно более консервативны - у всех
исследованных видов состав иммунохимически родственных БХШ 310 белков пра
ктически одина ков. Различия наблюдаются только в количественном
содержании данных белков. Этот фа кт позволяет связать отмеченный выше
переход митохондрий кукурузы во время
низкотемпературного стресса в низкоэнергетическое состояние с разобщающей
а ктивностью БХШ 310.
Таким образом, на основании полученных результатов можно сделать вывод,
что у всех исследованных видов при помощи вестерн-блоттинга в
митохондриальных белках обнаруживаются ка к БХШ 310, та к и иммунохимичес
ки родственные ему белки, причем у наиболее холодоустойчивых озимой ржи и
пырейни ка содержание БХШ 310 в митохондриальных белках наиболее вели ко.
Этот фа кт позволяет высказать предположение о связи уровня содержания
данного белка с более высокой устойчивостью этих видов к действию низ ких
температур.
8.2 Характеристика белков, иммунохимически родственных БХШ 310, в
субклеточных фракциях проростков озимой ржи В связи с тем, что, как
отмечено выше, БХШ 310 был обнаружен в значительных количествах в
цитоплазме и митохондриях озимой ржи, а также с тем, что было показано
увеличение его содержания в озимых злаках во время низкотемпературного
стресса, был предпринят поиск родственных ему белков в ряде клеточных
фракций озимой ржи. Была та кже предпринята попытка установить некоторые
59
характеристики белков данного семейства в изученных суб клеточных
фракциях.
Нативный электрофорез цитоплазматических,
митохондриальных и ядерных белков озимой ржи (Secale cereale L.) по казал
значительные различия в составе нативных белков, что свидетельствует о
достаточной степени очистки исследованных клеточных фракций (рис. 26).
При помощи вестерн-блоттинга с поликлональными антителами на БХШ 310
среди цитоплазматических, митохондриальных и ядерных белков озимой ржи
нами был проведен поиск иммунохимически родственных БХШ 310 белков.
Рис. 26. Нативный электрофорез цитоплазматических (1), ядерньых (2) и
митохондриальньых (3) белков контрольньых проростков озимой ржи. Белки
окрашеньы Кумасси-R-250.
Прежде всего, вестерн-блоттинг цитоплазматических нативных белков озимой
ржи показал, что в цитоплазме, кроме собственно белка с молекулярной
массой 310 кДа, имеется семейство иммунохимически родственных БХШ 310
белков. В данной клеточной фракции присутствуют высокомолекулярный
иммунохимически родственный БХШ 310 белок с молекулярной массой около 470
кДа, белок с молекулярной массой около 230 кДа и ряд относительно
60
низкомолекулярных иммунохимически родственных ему белков с молекулярными
массами около 140 кДа (рис. 27).
Спектр нативных митохондриальных белков ржи содержит меньше белков в
области выше 150 кДа, чем спектры цитоплазматических и ядерных белков. В
митохондриях полностью отсутствует белок с молекулярной массой около 470
кДа. Значительно меньше, чем в цитоплазме и ядрах, белка с молекулярной
массой 310 кДа (рис. 26). Вестерн-блоттинг показал, что в данной
клеточной фракции, кроме собственно белка с мол. массой 310 кДа, имеются
также все иммунохимически родственные БХШ 310 белки с меньшей, чем у БХШ
310, молекулярной массой (рис. 27). В то же время вестерн - блоттинг
показал, что белок с мол массой 310 кДа содержится в митохондриях в
несколько меньшем количестве, чем в цитоплазме.
Рис. 27. Вестерн-блоттинг с антисывороткой против БХШ 310
цитоплазматических (1), ядерньых (2) и митохондриальньых (3) белков
контрольньых проростков озимой ржи.
Спектр нативных ядерных белков ржи отличается в высокомолекулярной
области от цитоплазматических наличием значительного количества белка с
мол. массой около 470 кДа, а также тем, что белок, который в цитоплазме
имеет молекулярную массу 310 кДа, имеет несколько большую
61
молекулярную массу - 320 - 330 кДа (рис. 26). Вестерн-блоттинг ядерных
нативных белков озимой ржи показал, что в ядрах имеются иммунохимически
родственные БХШ 310 высокомолекулярные белки с мол. массами около 470
кДа, около 320 - 330 кДа, белок с мол. массой около 230 кДа и ряд
относительно низкомолекулярных иммунохимически родственных ему белков с
мол. массами около 140 кДа (рис. 27). При этом было обнаружено, что
содержание белка с мол. массой около 320 - 330 кДа в ядерных белках по
данным вестерн-блоттинга даже несколько превосходит содержание БХШ 310 в
цитоплазме.
Поскольку низкомолекулярные иммунохимически родственные БХШ 310 белки
были обнаружены при помощи вестерн-блоттинга среди нативных белков всех
исследованных клеточных фракций, наше внимание привлекли белки с
