Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кочетов Г.А. -> "Тиаминовые ферменты " -> 73

Тиаминовые ферменты - Кочетов Г.А.

Кочетов Г.А. Тиаминовые ферменты — М.: Наука, 1978. — 234 c.
Скачать (прямая ссылка): tiaminovinoviefermenti1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 67 68 69 70 71 72 < 73 > 74 75 76 77 78 79 .. 86 >> Следующая

Первую из трех указанных возможностей в настоящее время можно, по-видимому, исключить, так как каталитическая активность димерной формы транскетола-зы была недавно доказана [119].
Согласно литературным данным, распад тиаминовых ферментов на субъединицы осуществляется в тех же
204
условиях, что и отщепление от них кофермента. Во всяком случае это оказывалось справедливым для тех ферментов, которые могли быть проанализированы в этом плане.
Обычно холофермент и димерная форма фермента наиболее стабильны в слабокислой среде, 'примерно при pH 5,5—6,5. С 'повышением pH начинается постепенная диссоциация на субъединицы и отщепление кофермента Оба процесса усиливаются с переходом в более щелочную среду [2, 18, 142, 177, 180, 193, 216, 333, 361, 493, 5311.
Переход стабильной формы холофермента в нестабильную в кислой среде осуществлялся более резко. Так, например, ферментные препараты, выделенные из сердечной мышцы свиньи и осуществляющие окислительное декарбоксилирование пировиноградной кислоты, после их выдерживания <при pH 4 8 все еще проявляют максимальную активность и без добавления извне тиаминпирофосфата. Смещение pH всего лишь на 0,2 в кислую область сопровождается значительным отщеплением кофермента [182]. По существу аналогичные данные были получены и с другими тиаминовыми ферментами [180, 493, 494]. Полное отщепление тиаминпирофосфата от различных ферментов происходило, как правило, в диапазоне pH 4,5—5,5.
И еще один факт, заслуживающий внимания: трис конкурирует с тиаминпирофосфатом за активный центр фермента (другими словами — способствует отщеплению кофермента от белка) и он же вызывает распад димерной формы фермента на субъединицы [21, 177].
Таким образом, кажется очевидным, что процессы распада тиаминовых ферментов на субъединицы и отщепления кофермента от холофермента тесно связаны между собой. Что в данном случае является первичным, а что вторичным — сказать в настоящее время трудно.
Транскетолаза пекарских дрожжей состоит из двух субъединиц и имеет два активных центра [17, 119, 219, 279]. Транскетолаза, выделенная из листьев шпината, является мономером и содержит в составе своей молекулы один активный центр [246]. Данные о количестве активных центров у других тиаминовых ферментов (менее определенны. Так, свежевыделенные препараты пи-
205
руватдекарбоксилазы пивных дрожжей (фермент является днмером) содержат около 3 молей тиаминпирофосфата на моль белка и показывают примерно 70% активности от максимальной, т. е. измеренной с добавлением в среду свободных кофакторов [516]. Отсюда авторы делают заключение, что молекула фермента может связывать 4 молекулы тиаминпирофосфата, причем, судя по результатам измерения активности, все они, по-видимому, выполняют каталитическую функцию. Опыты с необратимым ингибитором—глиоксиловой кислотой [507] — подтверждают эту точку зрения. Наряду с этим в исследованиях, проведенных с тем же ферментом, показано наличие в нем двух (или точнее — как минимум двух) субстрат-связьгвающих участков на димерную молекулу белка [96, 510]. Столько же участков связывания для субстрата получено и при исследовании пиру-ватдекарбоксилазного компонента пируватдегидрогеназного комплекса Е. coli [457], молекула которого также построена из двух субъединиц. Таким образом, во всех исследованных случаях на одну субъединицу приходится как минимум один активный центр.
Итак, с одной стороны, при физиологических условиях тиаминовые ферменты (лишенные тиаминпирофосфата) находятся в растворе как в мономерной форме, так и в димерной (а в некоторых случаях исключительно в виде мономерной), причем субъединицы, по-видимому, идентичны, и на каждую приходится как минимум один активный центр. А с другой стороны — кофермент способствует ассоциации мономеров в димер (или предотвращает распад димерной формы на субъединицы), и до сих пор неизвестно, способны ли отдельные субъединицы катализировать ферментативные реакции. Исключение составляет лишь транскетолаза из листьев шпината, которая активна в мономерной форме. Но нет данных и о том, что этот фермент может существовать в димерной форме.
Активные центры транскетолазы пекарских дрожжей сильно различаются по величинам константы связывания для тиаминпирофосфата [288]. Возможно, поэтому примерно половина кофермента отщепляется уже в процессе выделения и очистки фермента, а оставшаяся часть может быть удалена лишь при использовании достаточно жестких воздействий.
206
Неравнозначность кофсрмент-связывающих участков предполагается и для других тиаминовых ферментов (хотя количественные исследования в данном случае не проводились). Так, например, 6 метил-тиаминпирофос-фат, аналог кофермента, в шестое положение пиримидинового кольца которого введена метильная группа, не способен выполнять каталитическую функцию. Способность же взаимодействовать с апопируватдскарбоксила-зой сохраняется, причем только с половиной всех имеющихся активных центров фермента. Остальные участки связывания тиаминпирофосфата остаются свободными и не способны взаимодействовать с аналогом [433].
Предыдущая << 1 .. 67 68 69 70 71 72 < 73 > 74 75 76 77 78 79 .. 86 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed