Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кочетов Г.А. -> "Тиаминовые ферменты " -> 63

Тиаминовые ферменты - Кочетов Г.А.

Кочетов Г.А. Тиаминовые ферменты — М.: Наука, 1978. — 234 c.
Скачать (прямая ссылка): tiaminovinoviefermenti1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 57 58 59 60 61 62 < 63 > 64 65 66 67 68 69 .. 86 >> Следующая

Можно предположить, что липоилдегидрогеназа частично отщепляется от пируватдегидрогеназного комплекса в процессе его выделения и очистки из митохондрий (такая возможность предполагается и находит экспериментальное подтверждение для пируватдекарбокеилазно-го компонента пируватдегидрогеназного комплекса мышцы сердца свиньи [20Ь]). Действительно, на некоторых стадиях очистки обнаруживались ощутимые количества лнпонлдегидрогеназы, несвязанной с комплексом [335, 425], однако ее добавление к пнруватдегидрогеназному комплексу не сказывалось на скорости окислительного де-карбоксилирования пир}вата. Не исключено, однако, что конформация лнпонлдегидрогеназы, отщепившейся от пи-руватдегидрогеназного комплекса в процессе его выделения, изменяется таким образом, что фермент теряет способность связываться с комплексом и поэтому не может проявить свое каталитическое действие.
Предлагается и другое объяснение низкого содержания лнпонлдегидрогеназы в пнруватдегидрогеназном ком-
177
плсксе. Заключается оно в том, что одча молекула ли-иоилдегидрогеназы, нли ее мономерная форма, присоединенная к липоилтрансацетилазе, способна взаимодействовать с несколькими остатками восстановленной лнпоевой кислоты [84].
Киназа пируватдегидрогеназы прочно связана с ли-поилтрансацетилазным компонентом пируватдегидрогеназного комплекса |327—329]. На моль липоилтрансацетилазы приходится около 5 молей киназы (объектом исследования в данном случае служила почечная ткань быка). Приведенные данные трудно объяснить с точки зрения специфичности связывания киназы с лнпоил гранс-ацетилазой, так как молекула последней, как уже указывалось выше, состоит из 60 очень близких по свойствам полипептидных цепей. Остается поэтому предположить отсутствие специфичности во взаимодействии этих двух ферментов или, как и в случае липоилдегидрогеназы, возможность отщепления киназы при выделении пируватдегидрогеназного комплекса [420].
Связь фосфатазы пируватдегидрогеназы с пируват-дегидрогеназным комплексом непрочная и легко разрушается при изолировании комплекса из ткани. На основании величины молекулярного веса высокоочищенных препаратов фермента и их удельной активности, а также активности, определяемой в экстрактах митохондрий, было рассчитано количественное содержание фосфатазы. Оказалось, что в экстрактах митохондрий почек и сердца быка на моль пируватдегидрогеназного комплекса приходится около 5 молей фосфатазы [327], т. е. столько же, сколько и другого регуляторного фермента — киназы пируватдегидрогеназы. Это примерно в десять раз меньше, чем содержание в пируватдегидрогеназном комплексе пируватдекарбоксилазы — субстрата двух указанных выше ферментов. Не исключается, однако, что в экстрактах митохондрий часть киназы пируватдегидрогеназы и фосфатазы пируватдегидрогеназы находится в неактивной форме [84].
178
Биологическая роль фосфорилирования и дефосфорилирования пируватдегидрогеназных ко шлексов
Высокоочищенные ферментные препараты пируватдегидрогеназных комплексов, получаемые в разных лабораториях, часто имели неодинаковую удельную активность даже при использовании одного и того же источника выделения. В ряде случаев различия были весьма существенные. Это дало возможность предположить, что пируватдегидрогеназные комплексы выделяются в частично фосфорилированной (неактивной) форме. Предположение получило экспериментальное подтверждение, которое заключалось в следующем.
Если препарат пиру ватдегидрогеназного комплекса, выделенный из сердечной мышцы свиньи и содержащий киназу, но не содержащий фосфатазу, инкубировать с фосфатазой в присутствии магния, то измеряемая величина его ферментативной активности увеличивается примерно в полтора раза (рис. 46, кривая 2) (в других опытах степень активации была выражена в еще большей степени). За то же время в контроле (с магнием, но без фосфатазы) никаких изменений не наблюдалось (кривая У). Последующее добавление АТФ, меченного по конечному фосфатному остатку, и ЭДТА (для связывания избытка ионов магния, требовавшихся для действия фосфатазы) (на рис. 46 показано стрелкой) приводит к полной инактивации ферментного препарата в обеих пробах (кривые У и 2). Включение меченого фосфора в контрольные препараты (кривая 3) происходило в значительно меньшей степени по сравнению с препаратами, которые предварительно обрабатывали фосфатазой (кривая 4). Объясняется это тем, что контрольные препараты уже изначально содержали часть пируватдегидрогеназного комплекса в фосфорилированной форме.
Аналогичные результаты были получены и при работе с гомогенатамн мозга крыс (475]. Пируватдегидрогеназ-ная активность в них равнялась 38,9 ME на 1 г сырого веса ткани, а после преинкубации с МО-2 М магнием (концентрация катиона, достаточная для максимальной активации присутствовавшей в гомогенатах фосфатазы ннруватдегидрогеназы) активность увеличивалась до 56,6 ME. Болес того, частично очищенные препараты пи-
179
Рис. 46. Фосфорилирование и изменение ферментативной активности пируватдегидрогеназного комплекса, выделенного из сердечной мышцы свиньи [549]
Предыдущая << 1 .. 57 58 59 60 61 62 < 63 > 64 65 66 67 68 69 .. 86 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed