Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кочетов Г.А. -> "Тиаминовые ферменты " -> 58

Тиаминовые ферменты - Кочетов Г.А.

Кочетов Г.А. Тиаминовые ферменты — М.: Наука, 1978. — 234 c.
Скачать (прямая ссылка): tiaminovinoviefermenti1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 52 53 54 55 56 57 < 58 > 59 60 61 62 63 64 .. 86 >> Следующая

Из приведенных данных следует, что пируватдегид-рогеназа-киназа связана не с пнруватдекарбокенлазным,
164
а с липоилтрансацетилазным компонентом пируватде-гндрогеназного комплекса. Другой вывод, который можно сделать, заключается в том, что фосфокиназа почек быка активна не только с собственным пируватдегидро-геназным комплексом, но и с комплексами, выделенными из печени свиньи и сердца быка. Оба этих вывода подтвердились в последующих экспериментах, когда пиру-ватдегидрогеназа-киназа была отделена от липоилтранс-ацетилазы пируватдегидрогеназного комплекса почек и при добавпении к пируватдегидрогеназному комплексу сердечной мышцы вызывала в присутствии АТФ отчетливо выраженное его ингибирование (см. табл. 16).
Взаимозаменяемость показана и для активирующего фермента — фосфатазы пируватдегидрогеназы. С этой целью использовали пнруватдегидрогеназные комплексы, предварительно инактивированные преинкубацией с АТФ. Из данных табл. 17 видно, что восстановление активности пируватдегидрогеназного комплекса из почек быка идет в одинаковой степени вне зависимости от того, из какого источника выделена фосфатаза — печени свиньи или сердечной мышцы и почек быка. В свою очередь фосфатаза почек активировала пируватдегидрогеназный комплекс печени [328]. Аналогичные данные были получены и для других тканей. Так, фосфорилированный пируватдегидро-геназный комплекс из мозга свиньи реактивировался фос-фатазными препаратами, выдепенными из сердца свиньи и печени крыс, а пируватдегидрогеназный комплекс из сердечной мышцы свиньи — фосфатазой из мозга [475].
Таблица П
Функциональная идентичность фосфсипаз пируватдегидрогеназы, выдел нных из почек, печени и сердечной мышцы [329]
Источник инактивированного Источник Добавленной Степень восстановле
пируватдегидрогеназного фосфатазы ния активности.
комплекса % от максимальной
Почки Без добавок 13
То же Почки 87
» Печень 80
» Сердечная мышца 96
Печень Без добавок 0
То же Почки 78
165
Факторы, влияющие на фосфорилирование пиру ват дегид рогсназного комплекса
Влияние тиаминпирофосфата. Скорость инактивации пируватдегидрогсназного комплекса иод действием пи-руватдегидрогеназы-кпназы уменьшается при добавлении тиаминпирофосфата [419].
Фосфорилирование казеина, которое также способна осуществлять пируватдегидрогеназа-киназа, не изменяется в присутствии тиаминпирофосфата [259]. На основании этих данных авторы приходят к заключению, что снижение скорости инактивации пируватдегидрогеназно-го комплекса обусловлено взаимодействием тиаминпиро-фосфата с пируватдекарбоксилазным компонентом комплекса, а не с киназой.
С другой стороны, в результате фосфорилирования пируватдекарбоксилазного компонента его способность связывать тиаминпирофосфат существенно снижается [419]. Таким образом, участки связывания кофермента н фосфорилирования в молекуле пируватдекарбоксилазы влияют друг на друга.
Действие субстрата. Как следует из данных рис. 45, пируват снижает скорость инактивации (и фосфорилирования) пируватдегидрогеназного комплекса адснозип-трифосфатом. Это было показано с ферментными препаратами, полученными из разных источников: мозга [475] и сердца [328] свиньи, почек и сердца быка [259, 328]. жировой ткани [144], молочной железы крысы [127]. Эффективность пир\вата неодинакова. Так, 5-10-t М пируват практически полностью предохраняет от инактивации пируватдегидрогеназный комплекс, выделенный из сердца быка. В тех же условиях активность пируватдегидро-геиазного комплекса из печени свиньи и почек быка сохраняется соответственно лишь на 60 и 20%. Действие пнрувата специфично: акетоизовалериановая, а кето-глутаровая и щавелевоуксусная кислоты, не являющиеся субстратами пируватдегидрогеназного комплекса, не влияют на степень его инактивации. В то же время а-ке-тобутпрат, который так же, как п пируват, подвергается окислительному декарбоксилированню, оказывает защитный эффект, хотя п менее выраженный [328].
Исследование влияния пнрувата па скорость фосфо-рилирования ппруватдегндрогеназных комплексов позво-
166
Piic. 45. В пинию пиру патл па инактивацию и фосфорилирова-ние пнруватдегидрогеназного комплекса из мозга свиньи [475]
1. 2—радиоактивность белка: J.
4 — ферментативная активность; 2, 4 — пируват не добавлялся; 1,3 — добавлен пируват. По оси ордн-нат — соответственно, ферментативная активность и включение метки из ?-мР-АТФ в белок
АВщ/пип инп/nuft
лило установить, что значения кажущихся констант ингибирования варьируют от препарата к препарату и составляют величины порядка 0,9—2,0-10~3 М для пиру-ватдегидрогеназного комплекса почек быка и 0,8—3,0-•10-4 М — для препаратов, полученных из сердца быка. В то же время известно, что пируватдекарбоксилазиые компоненты двух указанных комплексов очень близки по свойствам: они имеют одинаковые молекулярные веса, субъединичную структуру и пептидные карты триптических гидролизатов [84, 327]. Практически одинаковы и величины их кажущихся констант Михаэлиса для пирувата при использовании его в качестве с\бстрата в пиру-ватдегидрогеиазной реакции. Они равны соответственно 4 4-10 5 А\иЗ,5.10-5М [259].
Предыдущая << 1 .. 52 53 54 55 56 57 < 58 > 59 60 61 62 63 64 .. 86 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed