Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кочетов Г.А. -> "Тиаминовые ферменты " -> 20

Тиаминовые ферменты - Кочетов Г.А.

Кочетов Г.А. Тиаминовые ферменты — М.: Наука, 1978. — 234 c.
Скачать (прямая ссылка): tiaminovinoviefermenti1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 14 15 16 17 18 19 < 20 > 21 22 23 24 25 26 .. 86 >> Следующая

Известно [468, 469] что если белок характеризуется наличием в нем статистического клубка и а-спиральной конформации и не имеет других упорядоченных структур, то для его водных растворов (диэлектрическая постоянная е более 30) выполняется такое линейное соотношение: А225=—0,55 А,вз—430, а для белка, находящегося в органическом растворителе (е менее 30), А225=—'0,55 \193—280. Соотношение нарушается, если в молекуле белка содержатся также другие структуры.
Экспериментальные данные, полученные с транскето-лазой (см. табп. 3), представлены графически на рис. 5, где показаны результаты определения параметров А,вз и А225 при разных значениях pH. Оказалось, что все экспериментальные точки расположены ниже прямой, отражающей лннейн>ю зависимость между параметрами Alfl3 и А225 для белков, находящихся в водной среде (/), и часть из них, которая соответствует значениям pH 3, 4,
5 и 11, ложатся на прямую, характерную для белков, находящихся в органических растворителях (2).
Таким образом, подтверждалась первая нз двух возможных причин несоответствия степени спирализации, определяемой по параметрам А,.,3 и А225 (см. выше), а именно — спиральные участки транскетолазы находятся в гидрофобном окружении, т. е. расположены внутри белковой молекулы фермента. Исходя из этого, была рассчитана степень спирализации транскетолазы по параметрам А1{13 и А225 так, как будто бы фермент находился в органическом растворителе (см. табл. 3).
56
Рис. 5. График Шехтера и Блоута зависимости Аг25 ОТ А|93 [26]
/ — для водных растворов;
2 — для органического раг-гворнтеля. Точки соответствуют каждой паре значений параметров АИ5 н Лдо, найденных при анализе кривых дисперсии оптического вращения траискетолазы по уравнению Шехтера н Блоута для соответствующего pH
Рис. 6. Спиральность траискетолазы при разных значениях pH, как это найдено из параметров уравнения Шехтера и Блоута для органического растворителя [26]
Спиральность, рассчитанная по параметрам: A2js (/) и А|вз (2)
Как следует из данных рис. 6, различия в степени спнра-лизации стали не так резко выражены (сравни рис. 6 и рис. 4). Так как результаты, представ пенные на рис. 6, рассчитывались для среды и органического растворителя, оставшееся расхождение теперь уже нельзя объяснить наличием гидрофобного окружения спиралнзо-ванных участков в молекуле фермента.
Остается признать, что здесь выявляется вторая возможность, объясняющая причину неодинаковой степени спнрализации траискетолазы, определяемой по разным параметрам — наличие в молекуле фермента не только спиральной конформации, но и p-структуры.
Это подтверждают результаты, полученные при анализе кривых дисперсии оптического вращения и циркулярного дихроизма траискетолазы, снятых в области поглощения пептидной группы (рис. 7, 8). Кривые этн не характерны ни для спектра а-спнральной структуры, ни для p-конформации и отражали скорее суммарный вклад этих структур в оптическую активность фермента. Так. в случае дисперсии оптического вращения типичный
57
\
200 220 2ЬО Х,мм
/

Рис. 7. Спектр дисперсии оптического вращения апотранскстолазы в 2-10-3 М трис-буфере, pH 7,6 [283]
/ — ькснсриментальиая кривая (концентрация белка 0.IG мг/мл); 2— расчетная кривая (20% а-спиралеА, 40% 0-форм. 40%—клубка). Кювета — I мм
Рис. 8. Спектр циркулярного дихроизма апотранскстолазы в 2-10~3 М трис-Gуфере, pH 7,6 [283]
I — экспериментальная кривая (концентрация белка 0.62 мг/мл); 2 — расчетная кривая (2<)% а-спнралей. 40% fl фо| м, 40%—клубка). Кювета— I мм
спектр белковых структур с высоким содержанием а-спиральиых участков имеет пик при 198 им [558], а структуры с преимущественным содержанием р-конформации показывают наличие пика при 205—208 нм [430]. Экспериментально обнаруженный пнк иа кривой дисперсии оптического вращения транскетолазы (при 204 нм; см. рис. 7, кривая /) занимает промежуточное положение, несколько менее удаленное от области, характерной для р структуры, по сравнению с положением пика, свойственным a-структуре. Положение впадин па кривых дисперсии оптического вращения а-епп-ральной конформации и р конформации различается нес\щсственно; 233 нм — в первом случае п 230 нм — во втором [183]. Впадина кривой дисперсии оптического вращения транскетолазы находится при 232—233 нм (см. рис. 7, кривая /). Хотя и менее определенно, чем раньше (когда сравнивалось расположение пиков), но
58
ii здесь всс же можно говорить о промежуточном положении впадины кривой дисперсии оптического вращения транскетолазы и общем вкладе в оптическую активность фермента обоих типов упорядоченных структур,
Более четкие, хотя по существу аналогичные, данные были получены при анализе кривых циркулярного дихроизма. Действительно, спектр циркулярного дихроизма транскетолазы характеризуется наличием одного отрицательного пика при 220—222 нм и плеча при 212— 214 нм (см. рис. 8, кривая /). Белковые структуры с р-конформацией также имеют (в диапазоне 220—250 нм) один отрицательный пик, но при 217—218 нм. В случае же а-конформацни имеется два отрицательных пика — при 222 нм и в области 206 —209 нм [181, 505]. На основании данных, полученных при изучении дисперсии оптического вращения и циркулярного дихроизма в коротковолновой области спектра, было определено относительное содержание в транскетолазе различного типа конформаций, участвующих в построении пространственной структуры молекулы фермента. Для этого, согласно методу, предложенному Гринфильд и сотр. [183, 184], экспериментальные кривые дисперсии оптического вращения и циркулярного дихроизма, полученные для транскетолазы, сопоставляли с известными кривыми для поли-1.-лнзина, полученными при различном соотношении в нем а-спиральной конформации, р-струк-туры и клубкообразной конформации. Наилучшее соответствие по общей форме, положению пиков и точек пересечения с нулевой линией наблюдалось при сопоставлении экспериментальных кривых с кривыми для полн-Ь-лизина, содержащего 20% а-спнралей, 40% P-формы и 40% клубка (см. рис. 7, 8).
Предыдущая << 1 .. 14 15 16 17 18 19 < 20 > 21 22 23 24 25 26 .. 86 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed