Тиаминовые ферменты - Кочетов Г.А.
Скачать (прямая ссылка):
быка 37 000
• Данные о других ферментах слишком фрагментарны и здесь не приводятся.
*• Гуанидин хлорид.
*** Додецилсульфат иатрия.
(Исключение составляет пируватдекарбоксилаза из сердна свиньи, состоящая из двух, по-видимому, идентичных субъединиц. Однако этот фермент еще мало изучен, поэтому и в нем, возможно, удастся показать наличие четырех субъединиц.)
Субъединичная структура а2р2 связана с тонкими механизмами регуляции, характерными для тканей животных, о чем речь пойдет ниже.
ВТОРИЧНАЯ СТРУКТУРА
Исследование вторичной структуры траискетолазы пекарских дрожжей проводили с использованием методов дисперсии оптического вращения и циркулярного дихроизма [26, 283]. В табл. 3 приведены величины Ь„ и степени спиралнзацнн (НЬ„), определяемой по этому параметру. Они максимальны в диапазоне pH от 6 до 8 и равны соответственно —130° и 30%. Абсолютная велн-
Та'шща 3
Величины параметров уравнений Моффита \360\ и Шехтера Бдоцта [468, 4691 для траискетолазы и степень спиральноапи фермента при разных значениях pH [2f J
pH -Ь0 НЬ0. Ац| **Ai#3 для А193 ДЛЯ А **» 11А 226 ДЛЯ НА226 Для
% водных органиче водных органиче
растворов. ского рас растворов ского рас
% творителя. % творителя.
% %
1,9 33 14 - 100 18 14 ---243 9 12
3 45 16 20 21 17 ---275 11 13
4 85 22 280 28 24 ---38'» 16 20
5 110 26 390 31 27 ---490 22 26
(i 130 30 733 41 37 ¦---503 25 30
7 140 31 700 40 36 - 500 25 29
7,6 130 30 663 39 35 --->355 23 29
8 130 30 663 39 33 ---555 23 29
9 120 28 58Г> 37 33 ---310 23 27
10 90 23 440 33 29 ---420 18 22
11 8', 22 28') 28 24 ---395 17 21
12 15 11 ---140 17 13 - -270 И 14
12,7 0 8 ---314 12 8 -165 5 9
54
Рис. 4. Влияние pH на iL ^
степень спирализации ^
грлнекетолазы [26] ^
степень
С.пнральностъ, рассчитанная но параметрам: A2js (Л “ ^
О
в
/2 pH
чина параметра Ь„, а следовательно, н количественное содержание а спиральных структур уменьшаются при переходе в более кислую или в более щелочную область. В первом случае это выражено более резко.
По сути дела аналогичные данные о характере влияния pH были получены при определении параметров А|М н А225 и соответствующих нм величин степени спнралн-чацнп транскетолазы — НА1М и П12::5 (см. табл. 3 н рис. 4).
Своеобразна форма кривых зависимости степени спирализации от pH (см. рис. 4). Правая ее ветвь, соответствующая деспнрализацнп молекулы фермента в щелочной области,— выпуклая, а левая, отражающая го же самое, но в кислой области,— вогнутая. Вогнутая форма характерна, согласно литературным данным [4, 5], для дееннрализацпн белков, содержащих относительно ; шнные последовательности однотипных аминокислотных остатков, и осуществляется она в сравнительно узком диапазоне pH.
Для транскетолазы такими остатками могут быть остатки кислых аминокислот, содержащие карбоксильные группы. Уменьшение степени их ионизации по мере снижения pH раствора сопровождалось бы резким уменьшением количественного содержания а-спиральной формы. При pH ниже 3, когда карбоксильные группы в белке практически полностью протоннрованы, изменение кислотности среды должно сказываться в значительно меньшей степени. II действительно, снижение pH от 3 до 1,9 сопровождается уже лишь незначительным уменьшением степени синрализацни транскетолазы (см. табл. 3).
55
Остатки основных аминокислот в молекуле фермента распределены, по-видимому, более равномерно, на что указывает выпуклый характер кривой зависимости степени спирализации от pH среды, наблюдаемый в щелочной области (см. рис. 4).
Обратим теперь внимание на значительное расхождение между величинами степени спирализации, определяемыми по параметрам А1ЯЗ и А225, которое наблю далось при всех исследованных значениях pH, хотя и было выражено в неодинаковой степени (рис. 4).
Такое расхождение может указывать либо на наличие гидрофобного окружения еппрализованных структур [97, 202], либо на наличие в молекуле фермента, наряду с а-спиральной структурой, также и р-структ)ры [468, 469]. Обе эти возможности были исследованы.
